论文部分内容阅读
[目的] 用ISO药浴斑马鱼，构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型，并探究该模型体内tnnt2a的时空表达。 [方法] 用不同浓度的盐酸异丙肾上腺素(isoproterenol，ISO)持续多时间点药浴斑马鱼，通过对死亡率和心率的统计分析，以确定合适的药物浓度和用药时间，从而构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型;运用视频分析法间接测量斑马鱼的心功能指标，评价该模型的心功能变化情况;通过合成地高辛标记的斑马鱼心肌肌钙蛋白基因（cardiac troponin T type2a，tnnt2a）反义RNA探针，运用斑马鱼整体原位杂交技术进行tnnt2a的表达定位，双标准曲线相对定量qPCR法探究该心衰模型tnnt2a的表达水平。 [结果] 1.ISO对斑马鱼心率的影响:ISO浓度为0.015、0.020 mg/ml的处理组斑马鱼心率在24～48 hpf区间内的心率与对照组无统计差异，48 hpf之后ISO处理组心率均明显下降，各时间点与对照组比有显著差异(P＜0.01)，57 hpf后心率开始回升。 2.斑马鱼心功能改变:以0.020 mg/ml ISO药浴斑马鱼构建心衰模型，72 hpf斑马鱼心功能指标心室表面积改变率(FAC)、心室短轴缩短率(FSs)及长轴缩短率(FSL)均下降，其中FAC、FSL有显著差异（P＜0.01），FSs有统计差异（P＜0.05）。 3.斑马鱼tnnt2a的表达定位:用地高辛标记的tnnt2a RNA探针进行整体原位杂交，结果显示tnnt2a特异表达于斑马鱼心脏，且心室表达量高于心房。 4.斑马鱼tnnt2a的表达水平:双标准曲线相对定量qPCR结果显示经ISO药浴后的模型组斑马鱼tnnt2a在36、48、60、72、96 hpf5个时间点的表达水平显著增高(P＜0.01)。 [结论] 1.模型构建方案:用浓度为0.020 mg/ml的ISO分别在24、30、36、48、54 hpf五个时间段连续药浴斑马鱼，可构建斑马鱼心气虚证慢性心衰模型; 2.tnnt2a表达定位:tnnt2a在斑马鱼心脏表达，且心室表达量高于心房，其他部位未见表达。 3.tntnnt2a表达水平:斑马鱼心气虚证慢性心衰模型体内tnnt2a表达水平上调。