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类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一种自生免疫性疾病,主要出现滑膜炎症、血管翳形成和随后的关节损伤等病理改变。糖代谢是机体内最主要的代谢途径之一,主要是指葡萄糖在降解的过程,包括糖酵解、有氧氧化和磷酸戊糖代谢途径。糖酵解参与是氨基酸、脂类、核苷酸类三大代谢,并能产生三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate, ATP)。糖代谢不仅为机体提供能量,还通过信号通路,信号网络来调节多种生理过程。糖代谢在糖尿病、中风、精神分裂症和药物滥用等疾病中发挥重要作用。有研究表明,糖代谢包括糖酵解这一过程,在RA的发病机制和发生发展中起着重要作用。有研究认为,糖酵解活动增强,在RA的发病机制中,可能发挥着重要作用。既往主要是从免疫学和遗传学的角度进行研究RA的相关致病机制,对于糖代谢如何参与影响RA发生发展尚无深入研究。而能否从糖代谢角度思考RA这一过程,我们的很多研究成果和最近的研究都提供了新的视角。PCR Array是一项敏感和可靠的基因表达分析技术,不仅具有实时荧光定量PCR技术较好的准确性和灵敏度,同时还具有微列阵的高通量优势,可以进行信号转导途径、生理过程或与疾病相关的一组基因网络分析。本研究利用PCRArray法检测胶原诱导型关节炎(Collagen induced arthritis, CIA)大鼠的糖代谢相关基因,旨在检测糖代谢的关键酶在RA中的表达水平改变,并阐明作用,进一步探索糖代谢在类风湿性关节炎的作用.进一步探讨糖代谢和类风湿关节炎的相关性。方法:取牛II型胶原诱导大鼠(CIA组)和正常对照大鼠(NCR组)膝关节滑膜组织,提取总RNA,采用Rat Glucose Metabolism RT2 ProfilerTM PCR Array筛选表达不一致基因;采用RT-PCR法对CIA组和NCR组进行mRNA水平的检测,采用RT-PCR法和Western blot法检测类风湿关节炎(RA组)和骨关节炎(OA组)滑膜组织中基因mRNA水平和蛋白水平的表达。收集类风湿关节炎血清(RAB组)和正常献血者血清(NCB组),采用ELISA法检测血清中的表达水平。取膝关节滑膜组织原代培养FLS;采用人工合成的Si-RNA-PGK1干扰剂特异性抑制PGK1在RAFLS中的表达,阴性Si-RNA为阴性对照组,瞬时转染24 h后,采用RT-PCR法和Western blot法检测抑制效率,采用CCK-8、 Transwell、流式细胞术、ELISA等方法检测干扰PGK1表达后对细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和相关炎性因子分泌的影响。结果PCR Array检测显示,CIA组烯醇化酶(ENO1)、己糖激酶2(HK2)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK1)较NCR组表达上调(P<0.05),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶-1(PCK1)和丙酮酸脱氢酶激酶-4(PDK4)表达下调(P<0.05); RT-PCR法和Western blot法检测显示,RA组和OA组相比, ENO1和PGK1表达上调(P<0.05), ELISA法检测结果显示,RAB组和NCB组相比,PGK1表达升高(P<0.05)。转染特异性Si-RNA-PGK1后, 各干扰组与阴性对照组相比,Si-RNA-PGK1干扰剂转染24 h时,PGK1 mRNA水平抑制效果显著(P<0.05),RAFLS的增殖受到抑制(P<0.05), 细胞的侵袭能力下降(P<0.05),IFN-γ和IL-1β分泌降低(P<0.05)。结论:牛Ⅱ型胶原诱导大鼠和类风湿关节炎滑膜组织中糖代谢关键酶ENO1和PGK1表达增高,类风湿关节炎血液中PGK1表达增加,均提示类风湿关节炎中糖代谢活动增强,导致相关基因的表达异常。这说明糖代谢中的关键酶PGK1参与了细胞异常增殖、迁移以及IFN-γ和IL-1 p等炎症因子的分泌表达,说明PKK1对RA炎症因子表达及RAFLS的生物学功能有影响。