目的:获得具有生物学活性的羧基末端融合肿瘤血管导向肽NGR的突变人白细胞介素-2重组蛋白,并与人天然IL-2生物学活性进行初步比较。方法:通过PCR反应把构建在克隆载体pGEM-3zf(-)的mutant IL-2基因(其中Asn88Arg,密码子AAT→CGT,Cys125Ala,密码子TGT→GCT)的酶切位点改变为NdeI和BamHI,酶切后与经相同酶切后的表达载体pET-22b(+)-NGR连接(导向肽NGR的寡核苷酸片段已构建于BamH I和Pst I之间)。测序正确的构建质粒命名为pET-22b(+)-rmhIL-2-NGR,含有该表达载体的工程菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-rmhIL-2-NGR经IPTG诱导表达,并对产物进行溶解变性、复性和阴离子交换层析纯化。目的蛋白用蛋白免疫印迹试验分别测定导向肽NGR和mutant IL-2的抗原性,并使用IL-2依赖的CTLL-2细胞增殖法体外测定IL-2生物学活性检测。结果:工程菌以包涵体形式表达重组蛋白,分子量大小与目的蛋白预期值相符约17kDa,表达量占菌体可染蛋白的40%以上,诱导表达后4h表达量达最高值。新生的蛋白条带通过Western blot检测与抗IL-2单抗和抗NGR单抗特异性结合。对重组工程菌在相同条件下进行摇瓶培养,收集诱导表达后菌体经溶菌酶加去污剂裂菌、包涵体的洗涤、溶解变性和透析复性,最后经阴离子交换色谱纯化获得纯度90%左右的重组蛋白。采用CTLL-2细胞增殖法测定融合蛋白IL2的活性为8×103 IU/ ml,蛋白含量为0.0784 mg/ml,比活性为1.02×105IU/ mg。为了确保融合蛋白生物活性的可靠性,我们用相同的方法,平行进行了含天然IL-2基因的工程菌DH5α/PBV220-native IL-2的表达与纯化。工程菌经活化、培养、收菌,SDS-PAGE及Western blot,发现工程菌同样以