研究背景:视神经损伤是一类以视网膜节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)进行性凋亡及视神经萎缩为主要病理特征并最终致盲的眼部疾病。目前,临床最常用的糖皮质激素、神经节苷脂、维生素E等对视神经损伤有良好的疗效,但也伴有不同程度并发症和毒副作用,且疗效尚有待提高。近年来有报道称某些中药或其提取物具有改善眼部血流,延长神经元存活时间,促进轴突生长等作用,疗效可能优于传统的视神经损伤治疗药,3,4-二羟基苯甲酸甲酯(methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB)就是其中之一。MDHB是从植物马兰、白花蛇舌草中提取的单体。前期实验表明MDHB能在体外对抗β淀粉样蛋白(Aβ)的神经毒性,保护皮质神经元;能通过抗氧化、抗凋亡,提高线粒体膜电位对小鼠视网膜节细胞株(RGC-5细胞株)产生保护作用。目前尚无MDHB在体内对RGCs具有保护作用的研究报道。目的:研究MDHB对N-甲基-D天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)诱导的大鼠RGCs是否具有保护作用并探讨其机制。方法:采用成年SD大鼠,实验分为6组:空白对照组、模型对照组、阳性药对照组(美金刚,10mg/kg)、MDHB低剂量组(25mg/kg)、MDHB中剂量组(50mg/kg)、MDHB高剂量组(100mg/kg)。在水合氯醛麻醉下大鼠玻璃体后注射NMDA以造成RGCs损伤模型,同时,除空白对照组和模型对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组分别腹腔注射相应的药物,连续5天。用黑白箱检测大鼠视觉行为变化,采用视网膜电图(ERG)记录大鼠视觉电生理变化,使用节细胞特异性抗体Brn-3a标记节细胞(免疫组化法)测定节细胞密度,通过Western-blot检测凋亡通路相关蛋白如Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3和激活细胞或促进细胞存活的Akt、BDNF表达情况。并实验观察MDHB腹腔注射能否透过血眼屏障(blood ocular barrier,BOB)。结果:1.MDHB能够迅速透过血眼屏障到达视网膜,腹腔注射2min后通过HPLC即可在视网膜检测到药物。2.黑白箱测试结果表明,与模型组比较,MDHB低剂量(25mg/kg)组、中剂量(50mg/kg)组均能够改善大鼠视觉行为能力(P<0.01);HE染色与免疫组化结果显示MDHB中剂量(50mg/kg)组能够维持存活RGCs的密度(P<0.05);ERG实验结果显示MDHB可以增加RGCs对光反应的强度(P<0.05)。3.Western blot结果显示,与模型组比较,MDHB中剂量(50mg/kg)、MDHB高剂量(100mg/kg)组Bax/Bcl-2、Celaved caspase-3/Caspase-3比值减少(P<0.05)、p-Akt/Akt比值增大(P<0.05)。结论:MDHB能够缓解NMDA所致的视网膜节细胞损伤,改善实验动物的视觉行为,其机制可能与MDHB的抗凋亡和神经营养作用有关。MDHB有可能成为新型的视神经损伤治疗药。