目的:本实验用PCR法扩增出的Trail基因引入慢病毒载体系统，生产Trail慢病毒颗粒并进行病毒滴度检测。方法:1.Trail基因的获得：根据GenBank中大鼠Trail基因序列(NM145681.1)，设计出该基因的特异性引物Trail-Agel-F和Trail-Agel-R，并且使用Agel酶的切位点。用PCR法从大鼠cDNA文库中扩增出目的基因。2.重组质粒的构建：采用In-Fusion技术，将酶切回收后的PCR产物线性交换连接入Agel酶切的真核表达载（GV218），产生目的重组质粒。连接产物质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，扩增目的重组质粒。3.连接产物的酶切鉴定：收集扩增后的连接产物，酶切后经电泳发现得到片段长度均与预期相符，基因测序结果亦正确，从而证明克隆Trail基因已成功。4.重组质粒转染293T细胞：用脂质体Lipofeetamine2000包裹构建的重组质粒和辅助包装载体，三质粒共同转染293T细胞，产生含有表达Trail蛋白的Lentivirus病毒颗粒。5.病毒检测：重组质粒转入293T细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达，行Western blot鉴定及使用Real-time定量PCR法检测病毒滴度。结果:成功得到Trail目的基因，重组质粒测序结果与GenBank中Trail基因序列(NM145681.1)比较，证实Trail基因序列正确；三质粒转染293T细胞后荧光显微镜观察到绿色荧光；WesternBlot检测观察到58KD附近处有特征条带，其大小和目的基因融合蛋白相吻合；孔稀释法及实时荧光定量PCR病毒滴度测定法测定结果为2E十8TU/ml。结论:成功克隆大鼠Trail基因和成功构建慢病毒载体系统并检测其滴度。为后续把有杀灭肿瘤的基因（Trail）转导进神经干细胞奠定基础。