目的 在临床上,由外伤或疾病引起的关节软骨损伤很常见,多为成年人和老年人,尤其是骨关节炎病,在老年人中更为常见。由于软骨组织中不具有血管与神经,其损伤后难以自我恢复。区别以往的实验研究对象大多为胎兔或幼兔关节软骨细胞,我们以成兔的关节软骨细胞为研究对象,在IGF-1的单独作用下,通过细胞形态学,细胞计数,细胞计量等检测手段,了解单独应用IGF-1对其增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增提供理论基础和临床依据。 材料与方法 1.成年兔关节软骨分离、培养: 取22月龄（属于老龄兔）的日本大耳白兔,处死,片状削取关节软骨,手术刀将软骨切成1.0mm³大小碎块,消化、过滤、离心,搜集关节软骨细胞,加入DMEM培养液（含20%胎牛血清,青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml）,血细胞计数仪计数,调整细胞数量4.0×10⁵每毫升,置于37℃,5%CO₂孵育箱内培养。3天后第一次换液,以后隔日换液,至细胞85%融合后,胰酶消化、传代。 2.倒置显微镜下观察软骨细胞生长状况。 3.细胞爬片HE染色光镜下观察软骨细胞形态。 4.MTT比色实验测定软骨细胞存活数。 5.细胞计数绘制生长曲线观察在IGF-1作用下软骨细胞的增殖情况。 6.采用t检验,进行统计学分析。