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目的:JBP485(cyclo-trans-4-L-hydroxyprolyl-L-serine;环状—反式—4—左旋—羟脯氨酸—左旋丝氨酸)是一种二肽(dipeptide),从日本抗肝炎药物Laennec(人胎盘水解物)中分离,对自身免疫性肝损伤有一定治疗作用。头孢氨苄(cephalexin)为第一代口服头孢菌素,主要用于敏感菌引起的尿路、呼吸道及皮肤软组织等轻度感染。本文旨在阐明口服抗肝炎化学合成二肽JBP485与头孢氨苄联合用药的药代动力学特征及相互作用机制。
方法:建立灵敏、快速、高效的LC-MS/MS内标法检测大鼠生物样品及细胞裂解液中JBP485与头孢氨苄的浓度及含量。(1)体内口服吸收实验:将大鼠乙醚麻醉后采取以下分组给药:单独给与JBP48525mg/kg:单独给与头孢氨苄50 mg/kg;同时给与JBP48525 mg/kg和头孢氨苄50 mg/kg。灌胃后于设定时间点颈静脉取血,测定二者的血药浓度。(2)离体翻转肠实验:0.5 mM JBP485与1mM头孢氨苄单独或同时加入外翻肠囊模型,考察两种药物从粘膜侧到浆膜侧摄取的相互影响,并使用20 mM Gly-sar(甘氨酰肌氨酸,典型的二肽底物)及1mM JBP923(JBP485的衍生物)分别与0.5 mM JBP485同时联用,考察二者对其肠道摄取的影响。(3)原位单向空肠灌流实验:0.5 mM JBP485与1mM头孢氨苄单独或同时灌流大鼠空肠肠段,门静脉取血考察两种药物经空肠吸收的相互影响,同时也考察了Gly-sar及JBP923对JBP485经小肠吸收的影响。(4)体内肾排泄实验:以与口服给药同样分组方式及相同剂量颈静脉给药后于各时间点收集血浆样品及尿液,考察血药浓度、尿液中经时累积药物排泄量及肾清除率的变化情况,并考察OATs的典型底物丙磺舒对JBP485肾排泄的影响。(5)离体肾切片实验:0.5 mM JBP485与1mM头孢氨苄同时加入肾切片摄取液中考察二者相互抑制情况,并通过JBP485联合应用Gly-sar、PAH及PCG等进一步阐明其排泄机制。
(6)转染细胞摄取实验:将于24孔板培养3天的单转染hOAT1-或hOAT3-HEK293细胞及vector-HEK293细胞用于药物摄取实验,考察JBP485与头孢氨苄相互作用机制及特异性底物对JBP485经hOAT1-或hOAT3-HEK细胞摄取的抑制作用。
结果:(1)口服吸收实验中,联合用药后JBP485与头孢氨苄的胃肠道吸收均明显减少;(2)离体翻转肠中两药联用后浆膜侧的药物浓度均显著下降,且Gly-sar及JBP923均可抑制JBP485经离体肠段的摄取;
(3)两种药物同时经空肠灌流后,其门脉血药浓度均显著减小,Gly-sar及JBP923也可明显抑制JBP485的肠道吸收;(4)静脉联用后二者的血药浓度与对照组相比均无明显变化,但肾脏清除率显著降低(JBP485从2.89 m1·min-1·kg-1降低为1.87 ml·min-1·kg-1,头孢氨苄从2.23m1·min-1.kg-1降低为1.58 ml·min-1·kg-1)。丙磺舒可以显著抑制JBP485及头孢氨苄的肾排泄:(5)肾切片实验结果表明,联合用药后JBP485与头孢氨苄可相互抑制彼此经肾切片的摄取。OAT1的特异性底物对氨基马尿酸(PAH),OAT3的特异性底物青霉素G(PCG)及PEPT2的特异性底物Gly-sat均能显著抑制肾切片对JBP485的摄取,提示JBP485与头孢氨苄均为肾脏OATs及PEPT2等转运体的底物:(6)单转染OAT1或OAT3的HEK293细胞对JBP485存在明显的可饱和摄取过程,并且该摄取可以分别被OAT1的特异性底物PAH及OAT3的特异性底物PCG所抑制;JBP485与头孢氨苄可相互抑制对方在该转染细胞的摄取,由此证实JBP485与头孢氨苄是OATs的底物。
结论:JBP485与头孢氨苄联合用药后可发生明显的药物相互作用,二者联合用药后的作用靶点在小肠和肾脏。二者口服联用后相互竞争肠道PEPTl而使彼此的吸收减少；二者静脉联合用药后相互竞争肾脏OATs、PEPT2等转运体而使彼此的尿排泄减少;二肽类药物JBP485和头孢氨苄同为PEPTs及OATs的底物,二者口服合用不合理,可使相互的疗效明显降低,静脉注射合用时要防止药物蓄积。