银杏食品中黄酮类物质的检测方法建立

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银杏(Ginkgo biloba)又称白果树,是地球上生长着的最古老的高等植物之一。银杏叶中主要含有黄酮类和萜内酯类两大类有效成分,它们具有扩张血管、增加血流量、改善血液循环动力障碍、降低脑血管阻力、抑制血栓形成及清除人体自由基等多种作用。黄酮类化合物是银杏的主要活性成分之一,其如今已成为世界多国科学家研究的热点。高效液相色谱法(HPLC)是一种经常在生物化学和分析化学领域用于对物质进行分离,定量和鉴定的色谱层析方法。该方法分离能力强,选择性好,灵敏度高,已成为食品安全分析手段中必不可少的组成部分。1.采用高效液相色谱法对银杏食品中的黄酮类化合物进行分离和分析。选择对山柰酚和异鼠李素有很好分离效果的Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱对银杏黄酮类化合物进行分离分析。实验选择甲醇-0.4%磷酸水溶液作为流动相,并对流动相组成比例进行了选择。结果表明,流动相甲醇:0.4%磷酸水溶液=60:40系统较佳,各色谱峰分离度良好,峰型尖锐,保留时间适中。对槲皮素、山柰酚和异鼠李素进行200~400nm的全波段扫描,选择360nm作为槲皮素、山柰酚、异鼠李素的测定波长。实验结果表明,采用上述HPLC法对银杏茶中主要活性成分槲皮素、山柰酚、异鼠李素等黄酮化合物的含量进行测定是可行的。本方法简便、准确,方法的线性关系、精密度良好,能满足实际检测需要。2.采用水提取法、超声波提取法、有机溶剂提取法三种不同的方法从银杏茶中提取黄酮类化合物,确定有机溶剂提取法提取效果最佳。对乙醇、甲醇、丙酮三种有机溶剂的提取效果进行考察,确定甲醇作为提取溶剂。研究甲醇提取法提取银杏茶中黄酮类化合物含量时,对黄酮类化合物提取效果影响显著的三个因素为25%盐酸添加量、提取温度和提取时间。分别设计单因素试验对以上三个因素进行考察,并通过正交试验分析得出三因素对总黄酮类化合物提取量影响的大小顺序是:提取温度>提取时间>25%盐酸添加量。确定最佳提取条件为:25%HC1添加量4mL,提取温度100℃,提取时间90min。3.选择了市场上的银杏类常见的食品如银杏晶、银杏酒和银杏功能饮料进行其总黄酮类化合物含量测定。应用本方法检测简便、准确、易于掌握,有利于加强对银杏食品的监管。
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