论文部分内容阅读
乌拉尔甘草（Glycyrrhiza uralensis）为北方道地药材,也是濒危药用植物,从乌拉尔甘草内生菌中筛选与其含有相同、相似或全新化合物,并采用内生菌发酵的方法工厂化生产乌拉尔甘草活性成分,对保护药用植物资源、创制新药及新型保健食品具有重要意义。选取甘草内生真菌GRP10作为研究对象,对其进行形态学和分子生物学鉴定,确定该菌株的种属。并以抑菌活性为指标,采用单因素及正交实验相结合的方法对其进行发酵工艺条件的优化,在最佳工艺条件下进行发酵培养,甘草内生真菌GRP10发酵液经硅胶柱分离分离后,采用高效液相色谱（HPLC）、质谱（MS）、核磁共振谱(1H-NMR和13C-NMR)对各晶体物质进行结构鉴定,并进行抑菌活性及抗氧化活性作用研究,主要结果如下:采用形态学观察法和18S r DNA序列分析法对甘草内生真菌GRP10菌株进行初步鉴定,菌株GRP10为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）。甘草内生真菌GRP10菌株的最佳发酵条件为:碳源为2%（m/v）葡萄糖,培养温度为28℃,摇床转数为140r/min,装液量为50%（v/v）,接种量为5%（v/v）,初始p H值为7.0,发酵时间为15d。经以抑菌活性为指标的验证实验证明,采用最佳发酵条件发酵甘草内生真菌GRP10菌株,其抑菌作用与优化前的抑菌活性相比,抑菌效果提高到22.6±0.30mm;采用高效液相色谱法对不同发酵时间的甘草内生真菌GRP10发酵液中香草酸进行含量测定,结果在15天内,发酵液中香草酸含量达到最大值2.0090μg/m L,验证了该工艺最佳发酵条件的正确性。10L甘草内生真菌GRP10发酵液浓缩后,分别经乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,各萃取液进行硅胶柱色谱分离纯化,在乙醚萃取部位分离得到单体物质A、单体物质B和单体物质C,乙酸乙酯萃取部位得到单体物质D和单体物质E。采用高效液相色谱（HPLC）、MS、核磁共振谱(1H-NMR和13C-NMR)对各单体物质进行结构鉴定,结果显示:单体物质A为反式肉桂酸,单体物质B为苯甲酸,单体物质C为甘草次酸,而单体物质D为香草酸。对各单体物质进行抗菌活性研究,结果显示,各单体化合物均显示出一定的抗菌活性;DPPH抗氧化活性测定结果显示,单体D的消除作用最强为70.81%,接近相同浓度下Vc的消除率97.22%。本研究从甘草内生真菌GRP10发酵液中分离得到了反式肉桂酸、苯甲酸、甘草次酸及香草酸,从而说明GRP10菌株是一株具有应用前景的甘草内生真菌。