狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的人和多种动物中枢神经系统感染的急性传染病,临床发病后死亡率几乎达到100%。通过实验室先前的研究发现,狂犬病毒糖蛋白（G）的第83、367位氨基酸对细胞适应性及致病力至关重要。本研究以狂犬病毒SAD株为母本质粒,运用重叠延伸PCR和点突变试剂盒构建K83R-rSAD、P367S-rSAD和K83R-P367S-rSAD三个重组病毒全长质粒。成功拯救出包括SAD亲本株及以上三个重组病毒,将重组病毒在细胞上连续传代5代,测定F6代病毒的多步生长曲线,在第72 h和第96 h时病毒滴度达到最高,K83R-rSAD为10^8.5FFU、P367S-rSAD为10^7.5FFU、K83R-P367S-rSAD为10^8.5FFU、SAD为10^7.0FFU,结果表明狂犬病毒糖蛋白第83位氨基酸突变后,狂犬病毒的滴度显著升高。对重组病毒G基因测序结果表明K83R、P367S在连续五代内稳定遗传。Western Blot检测结果表明G83突变后,G蛋白表达量明显升高。将上述四株病毒以脑部注射的方式接种于昆明白乳鼠,乳鼠全部死亡。分离鼠脑病毒后,以肌肉注射的方式免疫C57BL/6小鼠,小鼠发病并有死亡现象。免疫SAD亲本毒的小鼠全部死亡,免疫重组病毒K83R-rSAD、P367S-rSAD和K83R-P367S-rSAD后小鼠的存活率分别为72%、42.6%和63.6%,结果表明狂犬病毒G83和G367突变后能够降低对C57BL/6小鼠的致病性。综上所述狂犬病毒糖蛋白83和367位氨基酸的改变能够降低对小鼠的致病性,同时第83位氨基酸改变后狂犬病毒糖蛋白表达量升高。本研究成功拯救出致病力更弱的重组狂犬病病毒,为今后研制狂犬病毒弱毒疫苗了奠定基础。