【摘 要】
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背景:肝祖细胞（Hepatic/liver progenitor cell,HPC）是肝特异性干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,在严重肝损伤时被激活并发挥修复作用。因此,它具有较好临床应用价值。目前,其分化调控机制尚未完全明确。尽管HGF、TGFβ等信号通路均参与了肝脏发育和相关疾病进展过程,但是其是否共同调控HPC分化过程尚未知。目的:通过已有数据库分析HGF、TGFβ信号通路存在的潜在相互关
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背景:肝祖细胞（Hepatic/liver progenitor cell,HPC）是肝特异性干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,在严重肝损伤时被激活并发挥修复作用。因此,它具有较好临床应用价值。目前,其分化调控机制尚未完全明确。尽管HGF、TGFβ等信号通路均参与了肝脏发育和相关疾病进展过程,但是其是否共同调控HPC分化过程尚未知。目的:通过已有数据库分析HGF、TGFβ信号通路存在的潜在相互关系,在大鼠肝祖细胞系中验证:TGFβ1通过抑制HGF诱导的MET磷酸化进而调控HPC分化。方法:基于TCGA-LIHC数据库和基因芯片GSE7038、GSE28891分析TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、HGF、以及MET在肝癌组织和正常组织是否存在差异表达,以及其在肝祖细胞和分化的肝、胆细胞及原代肝、胆细胞之间是否存在差异表达。运用STRING数据库分析TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、HGF、以及MET之间的相互关系;si GCD数据库分析其同肝癌干细胞调控基因之间的相关性;DAVID数据库进行GO、KEGG富集分析。通过分别在WBF344细胞系中添加细胞因子HGF、TGFβ1、HGF通路抑制剂SU11274以及TGFβ1信号通路抑制剂LY2109761验证HGF、TGFβ信号通路是否存在相互作用。q RT-PCR检测肝祖细胞标志物AFP、肝细胞标志物ALB、胆管细胞标志物CK7的m RNA表达水平;Western blot检测信号通路相关分子MET/p-MET、AKT/p-AKT的表达水平。结果:TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、HGF和MET在肝癌组织和正常组织中以及在肝祖细胞和肝、胆细胞中的表达水平均存在显著差异。通过TCGA-LIHC、GSE28891分析后得出:TGFβ1与HGF、MET存在一定相关性。细胞标志物变化:ALB在HGF组和TGFβ1+HGF+LY组的表达显著升高,且随时间改变逐渐升高,两组之间不存在统计学差异（P=0.359）;在TGFβ1组、TGFβ1+HGF组、TGFβ1+HGF+SU组,ALB表达显著降低,随时间改变其表达逐渐降低。其中ALB在TGFβ1+HGF组的表达与HGF组、TGFβ1+HGF+LY组相比具有统计学差异（P=0.0257,P=0.0112）,而与TGFβ1组和TGFβ1+HGF+SU组相比,没有统计学差异（P=0.1071,P=0.3052）。CK7在TGFβ1组、TGFβ1+HGF组、TGFβ1+HGF+SU组的表达显著升高,且随时间改变逐渐升高,而在HGF组和TGFβ1+HGF+LY组显著降低,且随时间改变逐渐降低。其中CK7在TGFβ1+HGF组的表达,与HGF组、TGFβ1+HGF+LY组相比有统计学差异（P=0.0469,P=0.0342）,与TGFβ1组和TGFβ1+HGF+SU组相比,没有统计学差异（P=0.2403,P=0.0586）。AFP的表达在各组均呈现出随时间改变降低趋势,二甲基亚砜（DMSO）组除外。信号通路关键分子变化:MET在各组变化水平基本一致,p-MET在5min时开始出现表达,30min时相对较高,持续至60min。在30min时,TGFβ1+HGF组的p-MET表达低于HGF组、TGFβ1+HGF+LY组（P=0.0054,P=0.015）,而高于TGFβ1组、TGFβ1+HGF+SU组（P=0.001,P=0.0016）。AKT/p-AKT变化趋势基本与MET/p-MET一致。AKT的表达量在各组基本一致,在5min时出现p-AKT的表达,在30min时相对较高,持续至60min。在30min时,TGFβ1+HGF组的p-AKT表达低于HGF组、TGFβ1+HGF+LY组（P=0.0049,P=0.0048）,而高于TGFβ1组、TGFβ1+HGF+SU组（P=0.0127,P=0.0098）。结论:TGFβ、HGF信号通路在肝祖细胞系存在相互作用,TGFβ1通过抑制HGF诱导的MET磷酸化进而调控HPC分化。
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