KiSS1基因激活ERK1/2磷酸化通路抑制鼻咽癌转移的研究

来源 :蚌埠医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cuicuiCUICUI123
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目的:明确KiSS1及其受体基因(hOT7T175或GPR54)调节鼻咽癌细胞转移的分子机制。方法:(1)培养高转移活性的鼻咽癌细胞系SUNE-1-5-8F以及低转移鼻咽癌细胞系SUNE-1-6-10B,并通过实时聚合酶链式反应(RT-PCR)以及蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)实验,检测KiSS1基因及其受体基因分别在两类细胞系中的表达,明确KiSS1基因及其受体KiSS1-R基因与鼻咽癌转移能力的关系;(2)通过蛋白免疫印迹法,检测经典细胞转移调控相关的黏着斑激酶FAK及ERK1/2信号通路的磷酸化激活,以及EZR蛋白的表达与鼻咽癌细胞转移能力的关系;(3)过表达KiSS1基因及KISSS1-R基因,并通过划痕实验及Transwell实验分析过表达KiSS1基因(SUNE-KISS1),过表达KiSS1-R(SUNE-1R)以及同时过表达KiSS1和KiSS1-R基因(SUNE-1R-KISS1)的SUNE-1-5-8F鼻咽癌细胞系的迁移能力;(4)通过Western blot检验过表达KiSS1基因及KiSS1-R基因后,p-FAK,p-ERK以及EZR蛋白的表达水平。(5)加入ERK1/2通路特异性阻断剂PD98059阻断后,进一步观察过表达KiSS1基因及KiSS1-R基因对鼻咽癌迁移能力,以及细胞转移相关蛋白p-FAK,EZR的变化。(6)最后,通过siRNA干扰抑制KiSS1基因表达,进一步验证KiSS1基因对鼻咽癌细胞的调控作用。结果:(1)通过RT-PCR实验发现,KiSS1基因在低转移活性鼻咽癌细胞系SUNE-1-6-10B中表达量较高,而在高转移活性的SUNE-1-5-8F中表达量相对较低。(2)通过Western Blot分析发现,KiSS1蛋白及其受体Kiss1-R,磷酸化的黏着板激酶(p-FAK)与鼻咽癌细胞转移能力呈负相关;肌动蛋白结合蛋白EZR与癌细胞转移能力呈正相关。(3)划痕及Transwell分析实验发现,过表达KiSS1基因及其受体KiSS1-R基因均能够有效抑制高转移活性的SUNE-1-5-8F细胞的转移能力。(4)Western Blot分析发现,过表达Kiss1及Kiss1R基因增加FAK蛋白的磷酸化(p-FAK)及ERK1/2通路磷酸化(p-ERK1/2)的表达,而抑制EZR蛋白的表达。(5)将ERK1/2通路特异性的阻断剂PD98059加入后,过表达KiSS1及KiSS1-R基因引起的细胞迁移抑制被阻断。同时,由过表达KiSS1及KiSS1-R引起的p-FAK与p-ERK1/2的上调,及EZR的下调被恢复。(6)通过siRNA干扰抑制KiSS1基因表达后,SUNE-1-5-8F细胞的迁移能力增加。结论:通过RT-PCR,Western blot,Transwell分析等发现,过表达KiSS1基因可以明显抑制鼻咽癌细胞的迁移能力;同时,通过siRNA干扰KiSS1基因的表达能够增加鼻咽癌的迁移能力。综合以上两个结论,我们充分必要的验证了KiSS1基因及其受体KiSS1-R基因通过磷酸化激活ERK1/2通路,进而磷酸化激活p-FAK以及抑制EZR表达,最终抑制鼻咽癌的转移。
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