两种基因捕获突变小鼠ES细胞库的建立及adiponutrin基因功能研究

来源 :上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fragile2001000
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本研究利用基因捕获与polyA捕获相结合的方法,设计并构建两种新型基因捕获载体,并通过电转化方法获得大量小鼠突变ES细胞克隆,对其中部分克隆进行突变位点鉴定,建立了产生大规模位点明确的突变小鼠胚胎干细胞(ES)库和筛选发育相关基因的方法;构建了新基因adiponutrin基因打靶载体,并在小鼠ES细胞进行基因打靶,以期获得同源重组克隆并进一步建立knockout小鼠模型进行adiponutrin基因功能在体研究;利用3T3-L1细胞系和pGL3报告载体系统,建立了人adiponutrin基因调控区载体系列及稳定转染细胞系,通过观察3T3-L1向成熟脂肪细胞分化过程中报告基因的表达特点,确定了adiponutrin基因调控区范围及顺式作用元件所在范围;本研究还建立了潮霉素和新霉素双抗性转基因小鼠。
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