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目的：
本研究采用“六字诀”功法对1、2级原发性高血压患者进行干预，观察“六字诀”对原发性高血压患者血压、血管内皮功能及肠道菌群的影响，探索“六字诀”降压效应与肠道菌群及血管内皮损伤的关系，推断“六字诀”经菌群改变调控血压机制。
方法：
在成都市青羊区第九人民医院选取符合标准的26名1级、2级原发性高血压患者，采用随机数字表法将患者随机分为六字诀组和等待治疗组各13例。六字诀组患者采用“六字诀”运动干预，每周3次，每次1小时(早晨9:00-10:00)，持续12周。等待治疗组12周试验结束及3个月的随访后依据受试者意愿进行“六字诀”干预治疗。干预前记录两组受试者年龄、性别、身高、体重、身体质量指数(BMI)、心率、吸烟史及饮酒史，比较两组基线。干预前及干预后检测受试者24小时动态血压，每周三于运动前后测量即时血压；采用ELISA法检测受试者血浆一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血栓调节蛋白(TM)及血管内皮生长因子(VEGF)含量；以流式细胞术检测受试者血浆内皮微粒(EMP)含量。采用16SrDNA二代高通量测序技术检测受试者肠道菌群V4区基因序列，基于OTU分析结果进行Alpha多样性分析、物种差异分析及Beta多样性分析等多种方法比较受试者肠道菌群变化特征。对所得数据进行组间及组内差异比较，采用Pearson及Spearman相关性分析评估血压、内皮功能及肠菌菌属三者间的相关性。
结果：
1.基线结果
本试验最终纳入受试者25例，六字诀组13例、等待治疗组12例。六字诀组受试者男性9例，女性4例，平均年龄65.38±4.46岁，8人有吸烟史，8人有饮酒史；等待治疗组受试者男性5例，女性7例，平均年龄63.08±5.12岁，3人有吸烟史，4人有饮酒史；组间性别、年龄、吸烟史及饮酒史匹配。两组患者全日平均收缩压、全日平均舒张压、心率、BMI均无显著性差异，基线齐，具有可比性。
2.血压检测结果
(1)血压改善值结果：①干预后六字诀组受试者24hMSBP、24hMDBP改善值为负，等待治疗组24hMSBP、24hMDBP改善值为正，组间对比有统计学差异(P＜0.01)；②干预后六字诀组受试者白昼MSBP、白昼MDBP改善值为负，等待治疗组白昼MSBP、白昼MDBP改善值为正，组间对比具有统计学差异(分别P＜0.05，P＜0.01)；③干预后六字诀组受试者夜间MSBP、夜间MDBP改善值为负，等待治疗组夜间MSBP改善值为负、夜间MDBP改善值为正，组间对比无统计学差异(P＞0.05)。
(2)24小时动态血压结果：①干预后六字诀组受试者24hMSBP、24hMDBP、白昼MSBP、白昼MDBP及夜间MDBP与干预前相比具均有下降趋势，组内前后对比无统计学意义(P＞0.05)；夜间MSBP与干预前相比具有下降趋势，组内前后对比有统计学意义(P＜0.05)。②等待治疗组受试者24hMSBP、24hMDBP、白昼MSBP及白昼MDBP与干预前相比无下降趋势，组内前后对比有统计学差异(P＜0.01)；夜间MSBP与干预前相比下降、夜间MDBP与干预前相比略上升，组内前后对比无统计学差异(P＞0.05)。
(3)运动后即时降压效果：六字诀组受试者运动前后血压水平在不同时窗下(1月后、2月后、3月后)无明显上升或下降趋势，且无统计学意义(P＞0.05)。
3.血管内皮功能相关指标结果
(1)血浆NO、ET-1、TM、VEGF水平改变结果：
①干预后六字诀组受试者血浆NO水平升高，组内对比有统计学意义(P＜0.05)；血浆ET-1、VEGF呈下降趋势，组内对比无统计学意义(P＞0.05)；血浆TM呈下降趋势，组内对比有统计学意义(P＜0.05)。②等待治疗组受试者血浆NO水平呈下降趋势，TM水平略上升，组内对比无统计学意义(P＞0.05)；ET-1、VEGF水平上升，组内对比有统计学意义(分别P＜0.01、P=0.05)。
③干预前六字诀组受试者血浆NO水平低于等待治疗组，ET-1、TM、VEGF水平高于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)；④干预后六字诀组受试者血浆NO、VEGF水平高于等待治疗组，ET-1、TM、VEGF水平低于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)。
(2)血浆EMP水平变化结果：
①干预后六字诀组受试者血浆EMP水平下降，CD31+/CD42-水平上升，组内对比无统计学意义(P＞0.05)；等待治疗组受试者血浆EMP水平上升，CD31+/CD42-水平下降，组内对比无统计学意义(P＞0.05)。②干预前六字诀组受试者血浆EMP水平高于等待治疗组，CD31+/CD42-低于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)；干预后六字诀组受试者血浆EMP水平低于等待治疗组，CD31+/CD42-高于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)
4.肠道菌群物种变化结果
(1)Alpha多样性结果：干预后六字诀组物种多样性增加，而等待治疗组物种多样性减少。
(2)相对丰度变化
①菌群门水平：六字诀组门水平干预前后门水平菌群构成热图显示，厚壁菌门(Firmicutes)，拟杆菌门(Bacteroidetes)及变形菌门(Proteobacteria)相对丰度较高，属菌群的绝对优势菌门。经“六字诀”干预，原发性高血压患者肠内厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobiota)及脱硫杆菌门(Desulfobacterota)相对丰度上升，拟杆菌门(Bacteroidota)及放线菌门(Actinobacteriota)相对丰度下降，F/B值下降，均无统计学意义(P＞0.05)。等待治疗组受试者试验后F/B值上升，无统计学意义(P＞0.05)。
②菌群属水平：经“六字诀”干预，原发性高血压患者肠内克雷伯菌属(Klebsiella)、普氏菌属(Prevotella)及粪杆菌属(Faecalibacterium)含量下降，埃希氏杆菌属(Escherichia)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)及拟杆菌属(Bacteroides)含量上升，均无统计学意义(P＞0.05)。
③菌群种水平：经“六字诀”干预，原发性高血压患者肠内大肠杆菌(Escherichia_coli)、copri普氏菌(Prevotella_copri)相对丰度下降，普通拟杆菌(Bacteroides_vulgatus)及Subdoligranulum_variabile相对丰度上升，均无统计学意义(P＞0.05)。
(3)Beta多样性结果
①NMDS结果显示：六字诀组及等待治疗组受试者干预前样本散在分布，无明显差异；干预后两组患者样本组内间距较近、呈一定程度聚集，组间间距较远，组间存在菌群结构差异。
②UPGMA树状图显示：干预后六字诀组及等待治疗组组内样本间距近、枝长短、相似度高；而组间样本间距远、枝长间距长、相似度低，组间菌群存在差异性。
③间距Heatmap结果显示：干预后六字诀组与等待治疗组受试者样品菌群虽未呈现明显规律性差异，但组内间距较组间间距近，组间菌群存在结构差异。
5.相关性分析结果
本试验结果显示，两组受试者血浆NO改善值与24hMSBP改善值、24hMDBP改善值呈显著负相关(P＜0.01)，ET-1改善值、EMP改善值与24hMSBP改善值、24hMDBP改善值呈显著正相关(P＜0.01)，TM改善值、VEGF改善值与24hMSBP改善值、24hMDBP改善值呈正相关(P＜0.05)。受试者瘤胃球菌属(Ruminococcus)、copri普氏菌(Prevotella_copri)与24hMSBP正负相关(P＜0.05)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、大肠杆菌(Escherichia_coli)与EMP呈正相关(P＜0.05)，F/B值及其他属水平主要菌群改变与血压、内皮功能指标无明显相关性(P＞0.05)。
结论：
1.三个月“六字诀”干预可下调原发性高血压患者血压水平，调控血压异常波动，对夜间收缩压及24h平均血压改善值的调节最为明显，有利于血压稳态的维持及靶器官的保护，但未见显著运动后即时降压效果。
2.与等待治疗组相比，六字诀组受试者干预后内皮功能呈现良性发展趋势，“六字诀”可改善原发性高血压患者血管内皮功能，对增加NO及减少EMP产生影响较大。
3.“六字诀”锻炼可增加原发性高血压患者肠道菌群多样性，下调F/B值，改善菌群紊乱，降低克雷伯菌属(Klebsiella)及普氏菌属(Prevotella)相对丰度，增加埃希氏杆菌属(Escherichia)及拟杆菌属相对丰度，使菌群结构向有益于健康的方向发展。
4.“六字诀”锻炼可通过影响NO、ET-1、TM、VEGF及EMP释放等多条通路调节血管内皮功能，而其改善血压的主要机制可能为上调血浆NO含量改变血管张力调节血压。“六字诀”通过肠道菌群的降压机制可能为通过下调瘤胃球菌属、copri普氏菌含量来直接调节收缩压水平，或通过下调大肠杆菌含量时可减少EMP产生，改善内皮功能，进而影响血压。
本研究采用“六字诀”功法对1、2级原发性高血压患者进行干预，观察“六字诀”对原发性高血压患者血压、血管内皮功能及肠道菌群的影响，探索“六字诀”降压效应与肠道菌群及血管内皮损伤的关系，推断“六字诀”经菌群改变调控血压机制。
方法：
在成都市青羊区第九人民医院选取符合标准的26名1级、2级原发性高血压患者，采用随机数字表法将患者随机分为六字诀组和等待治疗组各13例。六字诀组患者采用“六字诀”运动干预，每周3次，每次1小时(早晨9:00-10:00)，持续12周。等待治疗组12周试验结束及3个月的随访后依据受试者意愿进行“六字诀”干预治疗。干预前记录两组受试者年龄、性别、身高、体重、身体质量指数(BMI)、心率、吸烟史及饮酒史，比较两组基线。干预前及干预后检测受试者24小时动态血压，每周三于运动前后测量即时血压；采用ELISA法检测受试者血浆一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血栓调节蛋白(TM)及血管内皮生长因子(VEGF)含量；以流式细胞术检测受试者血浆内皮微粒(EMP)含量。采用16SrDNA二代高通量测序技术检测受试者肠道菌群V4区基因序列，基于OTU分析结果进行Alpha多样性分析、物种差异分析及Beta多样性分析等多种方法比较受试者肠道菌群变化特征。对所得数据进行组间及组内差异比较，采用Pearson及Spearman相关性分析评估血压、内皮功能及肠菌菌属三者间的相关性。
结果：
1.基线结果
本试验最终纳入受试者25例，六字诀组13例、等待治疗组12例。六字诀组受试者男性9例，女性4例，平均年龄65.38±4.46岁，8人有吸烟史，8人有饮酒史；等待治疗组受试者男性5例，女性7例，平均年龄63.08±5.12岁，3人有吸烟史，4人有饮酒史；组间性别、年龄、吸烟史及饮酒史匹配。两组患者全日平均收缩压、全日平均舒张压、心率、BMI均无显著性差异，基线齐，具有可比性。
2.血压检测结果
(1)血压改善值结果：①干预后六字诀组受试者24hMSBP、24hMDBP改善值为负，等待治疗组24hMSBP、24hMDBP改善值为正，组间对比有统计学差异(P＜0.01)；②干预后六字诀组受试者白昼MSBP、白昼MDBP改善值为负，等待治疗组白昼MSBP、白昼MDBP改善值为正，组间对比具有统计学差异(分别P＜0.05，P＜0.01)；③干预后六字诀组受试者夜间MSBP、夜间MDBP改善值为负，等待治疗组夜间MSBP改善值为负、夜间MDBP改善值为正，组间对比无统计学差异(P＞0.05)。
(2)24小时动态血压结果：①干预后六字诀组受试者24hMSBP、24hMDBP、白昼MSBP、白昼MDBP及夜间MDBP与干预前相比具均有下降趋势，组内前后对比无统计学意义(P＞0.05)；夜间MSBP与干预前相比具有下降趋势，组内前后对比有统计学意义(P＜0.05)。②等待治疗组受试者24hMSBP、24hMDBP、白昼MSBP及白昼MDBP与干预前相比无下降趋势，组内前后对比有统计学差异(P＜0.01)；夜间MSBP与干预前相比下降、夜间MDBP与干预前相比略上升，组内前后对比无统计学差异(P＞0.05)。
(3)运动后即时降压效果：六字诀组受试者运动前后血压水平在不同时窗下(1月后、2月后、3月后)无明显上升或下降趋势，且无统计学意义(P＞0.05)。
3.血管内皮功能相关指标结果
(1)血浆NO、ET-1、TM、VEGF水平改变结果：
①干预后六字诀组受试者血浆NO水平升高，组内对比有统计学意义(P＜0.05)；血浆ET-1、VEGF呈下降趋势，组内对比无统计学意义(P＞0.05)；血浆TM呈下降趋势，组内对比有统计学意义(P＜0.05)。②等待治疗组受试者血浆NO水平呈下降趋势，TM水平略上升，组内对比无统计学意义(P＞0.05)；ET-1、VEGF水平上升，组内对比有统计学意义(分别P＜0.01、P=0.05)。
③干预前六字诀组受试者血浆NO水平低于等待治疗组，ET-1、TM、VEGF水平高于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)；④干预后六字诀组受试者血浆NO、VEGF水平高于等待治疗组，ET-1、TM、VEGF水平低于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)。
(2)血浆EMP水平变化结果：
①干预后六字诀组受试者血浆EMP水平下降，CD31+/CD42-水平上升，组内对比无统计学意义(P＞0.05)；等待治疗组受试者血浆EMP水平上升，CD31+/CD42-水平下降，组内对比无统计学意义(P＞0.05)。②干预前六字诀组受试者血浆EMP水平高于等待治疗组，CD31+/CD42-低于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)；干预后六字诀组受试者血浆EMP水平低于等待治疗组，CD31+/CD42-高于等待治疗组，组间对比无统计学意义(P＞0.05)
4.肠道菌群物种变化结果
(1)Alpha多样性结果：干预后六字诀组物种多样性增加，而等待治疗组物种多样性减少。
(2)相对丰度变化
①菌群门水平：六字诀组门水平干预前后门水平菌群构成热图显示，厚壁菌门(Firmicutes)，拟杆菌门(Bacteroidetes)及变形菌门(Proteobacteria)相对丰度较高，属菌群的绝对优势菌门。经“六字诀”干预，原发性高血压患者肠内厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobiota)及脱硫杆菌门(Desulfobacterota)相对丰度上升，拟杆菌门(Bacteroidota)及放线菌门(Actinobacteriota)相对丰度下降，F/B值下降，均无统计学意义(P＞0.05)。等待治疗组受试者试验后F/B值上升，无统计学意义(P＞0.05)。
②菌群属水平：经“六字诀”干预，原发性高血压患者肠内克雷伯菌属(Klebsiella)、普氏菌属(Prevotella)及粪杆菌属(Faecalibacterium)含量下降，埃希氏杆菌属(Escherichia)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)及拟杆菌属(Bacteroides)含量上升，均无统计学意义(P＞0.05)。
③菌群种水平：经“六字诀”干预，原发性高血压患者肠内大肠杆菌(Escherichia_coli)、copri普氏菌(Prevotella_copri)相对丰度下降，普通拟杆菌(Bacteroides_vulgatus)及Subdoligranulum_variabile相对丰度上升，均无统计学意义(P＞0.05)。
(3)Beta多样性结果
①NMDS结果显示：六字诀组及等待治疗组受试者干预前样本散在分布，无明显差异；干预后两组患者样本组内间距较近、呈一定程度聚集，组间间距较远，组间存在菌群结构差异。
②UPGMA树状图显示：干预后六字诀组及等待治疗组组内样本间距近、枝长短、相似度高；而组间样本间距远、枝长间距长、相似度低，组间菌群存在差异性。
③间距Heatmap结果显示：干预后六字诀组与等待治疗组受试者样品菌群虽未呈现明显规律性差异，但组内间距较组间间距近，组间菌群存在结构差异。
5.相关性分析结果
本试验结果显示，两组受试者血浆NO改善值与24hMSBP改善值、24hMDBP改善值呈显著负相关(P＜0.01)，ET-1改善值、EMP改善值与24hMSBP改善值、24hMDBP改善值呈显著正相关(P＜0.01)，TM改善值、VEGF改善值与24hMSBP改善值、24hMDBP改善值呈正相关(P＜0.05)。受试者瘤胃球菌属(Ruminococcus)、copri普氏菌(Prevotella_copri)与24hMSBP正负相关(P＜0.05)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、大肠杆菌(Escherichia_coli)与EMP呈正相关(P＜0.05)，F/B值及其他属水平主要菌群改变与血压、内皮功能指标无明显相关性(P＞0.05)。
结论：
1.三个月“六字诀”干预可下调原发性高血压患者血压水平，调控血压异常波动，对夜间收缩压及24h平均血压改善值的调节最为明显，有利于血压稳态的维持及靶器官的保护，但未见显著运动后即时降压效果。
2.与等待治疗组相比，六字诀组受试者干预后内皮功能呈现良性发展趋势，“六字诀”可改善原发性高血压患者血管内皮功能，对增加NO及减少EMP产生影响较大。
3.“六字诀”锻炼可增加原发性高血压患者肠道菌群多样性，下调F/B值，改善菌群紊乱，降低克雷伯菌属(Klebsiella)及普氏菌属(Prevotella)相对丰度，增加埃希氏杆菌属(Escherichia)及拟杆菌属相对丰度，使菌群结构向有益于健康的方向发展。
4.“六字诀”锻炼可通过影响NO、ET-1、TM、VEGF及EMP释放等多条通路调节血管内皮功能，而其改善血压的主要机制可能为上调血浆NO含量改变血管张力调节血压。“六字诀”通过肠道菌群的降压机制可能为通过下调瘤胃球菌属、copri普氏菌含量来直接调节收缩压水平，或通过下调大肠杆菌含量时可减少EMP产生，改善内皮功能，进而影响血压。