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目的:研究精子相关抗原6(SPAG6)与多种蛋白的相互作用,探讨SPAG6对小鼠精子发生过程的调控作用。方法:首先以小鼠睾丸组织cDNA文库为对象,使用酵母双杂交实验筛选出几种最可能与SPAG6相结合的蛋白,随后采用直接酵母双杂交实验证实这些蛋白与SPAG6产生相互作用;以野生型雄性小鼠为对象,选择第一波精子发生阶段,即小鼠出生后第6、8、12、16、20、24、28、30、35和42天的睾丸组织样本,Western blotting实验研究SPAG6、Snapin及COPS5的表达。以CHO细胞为对象,体外将pTarget/SPAG6分别和pEGFP-N2/Snapin、pEGFP-N2/COPS5以及pEGFP-N2/TCTE3表达质粒转染到细胞中,免疫荧光实验观察SPAG6与这三种蛋白是否在体细胞中存在共定位。以COS-1细胞为对象,体外将SPAG6/GFP分别和Snapin/Flag、COPS5/Flag以及TCTE3/Flag表达质粒转染到细胞中,免疫共沉淀实验(Co-IP)验证SPAG6与这三种蛋白间的相互作用。以Spag6基因敲除雄性小鼠为实验组,野生型雄性小鼠为对照组,H&E染色观察两组小鼠形态学上的差异;免疫荧光实验观察两组小鼠睾丸组织的生精细胞中SPAG6、Snapin及SPAG16L的定位;免疫荧光实验观察两组睾丸组织石蜡切片中SPAG6、Snapin和COPS5的定位。结果:酵母双杂交实验筛选出了多种具有不同功能的蛋白质,包括Snapin、COPS5、TCTE3、SPAG16L等。Snapin在雄性生殖细胞中具有与SPAG6相类似的定位,SPAG6与Snapin的C末端存在相互作用,进一步研究发现是SPAG6的199到280位氨基酸序列介导了SPAG6与Snapin之间的相互作用。Snapin在CHO细胞中定位于细胞质中,当其和SPAG6共表达时,两者有部分产生共定位;Flag抗体可将Snapin和SPAG6从细胞裂解液中共同沉淀,表示这两种蛋白之间存在相互作用。COPS5在CHO细胞中存在于整个细胞质,与SPAG6共表达时,则聚集在核膜附近;Co-IP实验发现Flag抗体可分别将COPS5和TCTE3与SPAG6从细胞裂解液中共同沉淀,表明COPS5和TCTE3与SPAG6之间存在相互作用。SPAG16L存在于圆形精子细胞的细胞质和长形精子细胞的精子领中,在Spag6基因敲除小鼠中,SPAG16L仍存在于圆形精子细胞的细胞质中,但在长形精子细胞中仅存在痕量的SPAG16L,表示它在精子领中的定位消失。在野生型雄性小鼠中,SPAG6存在于精母细胞的胞浆囊泡、圆形精子和长形精子的顶体以及长形精子的精子领(manchette)中。比较Spag6基因敲除雄性小鼠(实验组)和野生型雄性小鼠(对照组)的睾丸组织结构形态,发现实验组小鼠睾丸组织中精子发生的晚期阶段受到干扰,生精小管的管腔发育迟缓,长形期精子细胞头部畸形,生精周期13-16阶段发生混乱,有细胞质裂片和残留体的异常形成。结论:SPAG6可能通过与其结合蛋白如Snapin、COPS5等形成复合物,影响雄性小鼠不同发育阶段生殖细胞以调控精子的发生。