千年桐内生真菌的筛选鉴定以及应用

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植物内生真菌能够缓解各种逆境环境并促进宿主植物的生长发育,其作用已为前人所证实。千年桐作为理想的生物油原料树种,为促进其在南方土壤中的生长发育,对千年桐内生真菌的研究极为必要。通过组织分离法分离纯化千年桐各器官部位的内生真菌,筛选出强势菌和溶磷菌,通过18SrDNA进行菌种鉴定;分别在普通条件和低磷条件下进行内生真菌的回接,形成内生真菌-千年桐共生体,通过测量千年桐幼苗的苗高和地径,采用手持便携式叶绿素计SPAD-502测定叶片的叶绿素相对含量,采用Handy Fluor Cam荧光成像仪测定叶绿素荧光参数,以及对植株养分和丙二醛(MAD)含量进行测定来分析内生真菌对宿主的生长发育是否有促进作用。主要研究结果如下:1.研究于2014年4月采自建阳市湖桥散生木(毛竹、杉木和千年桐混交林)、外墩采育场湖桥工区以及书坊林场11个种源29株千年桐的根、茎、叶,将其中的内生真菌进行了分离,共纯化得到内生真菌155株。其中,从茎器官中分离出的内生真菌是最多的,共有60株菌;其次是叶,50株菌;根中内生真菌最少,只有45株。2.内生真菌对千年桐植株的促生作用(1)内生真菌对千年桐生物量的影响:通过对植株的地径、苗高、根冠比和生物量等指标的测定分析,在筛选出的内生真菌中,盘多毛孢属(Pestalotia)菌株ZJ2对千年桐幼苗的促生作用最显著。(2)内生真菌对千年桐光合作用的影响:通过对植株的叶绿素相对含量和叶绿素荧光参数等各项指标的测定分析,在试验菌株中,木霉属(Trichoderma)菌株ZY3对千年桐幼苗光合作用的影响是最好的。(3)内生真菌对千年桐营养元素的影响:通过对碳元素、氮元素、磷元素和钾元素的测定分析,盾壳霉属(Coniothyrium)菌株ZY5是筛出的菌株中最有利于植株N、P、K含量增长的内生真菌。3.低磷胁迫下内生真菌对千年桐植株生长的影响低磷胁迫下内生真菌对千年桐幼苗生物量的影响:通过对植株的地径、苗高的测定分析,在四株溶磷菌中,青霉属(Penicillium)菌株SJ4在各低磷胁迫梯度下对植株苗高、地径生长的促进作用最显著;对根冠比指标的测定分析,青霉属(Penicillium)菌株ZG3和嗜热真菌属(Thermomyces)菌株SY1均能在各低磷胁迫梯度下较好地促进植株根系的生长;在各低磷胁迫梯度下对植株生物量进行测定分析,青霉属(Penicillium)菌株SJ3缓解胁迫危害的能力较强。综合各项指标,菌株SJ4在缓解低磷胁迫、促进植株生物量的蓄积方面的能力较其余菌株强。4.低磷胁迫下内生真菌对千年桐植株生理生态的影响低磷胁迫下接种内生真菌对千年桐光合特性的影响:通过叶绿素相对含量和叶绿素荧光参数等各项指标的测定分析,试验中的四株溶磷菌在促进千年桐植株光合特性方面均有显著缓解磷胁迫、促进植株生长的能力。其中,菌株SJ4的促进作用最为明显。通过对植株体内MDA含量的测定分析,表明青霉属(Penicillium)菌株SJ4、SJ3和ZG3均有利于降低植株体内细胞的损伤程度。5.低磷胁迫下内生真菌对千年桐植株养分的影响通过对植株地上部分和地下部分的碳含量、氮含量的测定分析,植株地上部分的碳氮比基本大于地下部分。通过对植株地上部分和地下部分的含磷量的测定分析,青霉属(Penicillium)菌株ZG3对植株的含磷量有显著的促进作用,尤其在轻度胁迫、中度胁迫和重度胁迫下的作用最显著。通过对植株地上部分和地下部分的含钾量的测定分析,青霉属(Penicillium)菌株SJ4对植株含钾量的增加有较显著的促进作用,在正常条件、轻度胁迫和重度胁迫下对地上部分含钾量的促进作用较明显;在正常条件、轻度胁迫下对地下部分含钾量的促进作用较明显。
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