论文部分内容阅读
目的:本实验旨在探讨MACC1过表达对于鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的影响及其机制。方法:（1）本实验采用Western blot技术检测鼻咽癌5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2细胞株中MACC1的蛋白表达水平。（2）通过慢病毒转染技术建立过表达MACC1的CNE-2细胞株,筛选出稳定转染的细胞。（3）采用QPCR及WB实验检测MACC1 mRNA及MACC1蛋白的表达,证实上调效率稳定有效后,进行后续细胞功能学实验。（3）实验分为3个组别:实验组（CNE-2 MACC1过表达稳定株组）;阴性对照组（CNE-2阴性稳定株组）;空白对照组（CNE-2空细胞组）。用克隆形成实验检测MACC1过表达后CNE-2细胞的放射敏感性变化。（4）流式细胞仪（FCM）检测MACC1过表达对CNE-2细胞细胞周期和凋亡的影响。结果:（1）CNE-2细胞瞬时转染效率约为80-90%。倒置荧光显微镜显示各转染组细胞发出GFP荧光。（2）在MACC1基因的慢病毒转染CNE-2细胞48h后,经QPCR检测,通过2-ΔΔCt分析法分析得出实验组MACC1 Ct值为为17.1,提示MACC1mRNA过表达;Western blot实验检测实验组细胞条带明显,提示MACC1蛋白的过表达,MACC1过表达鼻咽癌CNE-2细胞株构建成功。（3）克隆形成实验表明:在0、2、4、6Gy照射剂量下,实验组较空白对照组及阴性对照组存活分数（SF）均增高（P<0.05）。空白对照组较阴性对照组存活分数（SF）无明显变化（P>0.05）。构建单击多靶模型拟合细胞存活曲线,实验组、空白对照组及阴性对照组D0、Dq、N分别为（3.48,1.61,1.59）、（2.37,1.26,1.70）、（2.68,1.20,1.57）。实验组对于空白对照组及阴性对照组的放射增敏比（SER）分别为为0.68及0.77。（4）流式细胞仪检测结果表明:与空白对照组及阴性对照组比较,实验组细胞周期G0-G1期分布减少,S期分布增加,凋亡率减少（P<0.05）。结论:MACC1过表达可降低鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性,其机制可能与MACC1过表达鼻咽癌CNE-2细胞G0-G1期分布减少,S期分布增加以及细胞凋亡减少相关。