海洋环境中光合色素的HPLC-MS/MS分析技术研究与应用

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海洋环境中的浮游植物是海洋生态系统中的初级生产者,对食物网的上层结构、物质与能量传递的影响深远,同时对生物地球循环的过程起着关键作用。因此,浮游植物群落组成和丰度是衡量生态系统的结构和功能及动力学过程的重要指标。研究发现,浮游植物叶绿体中的光合色素在浮游植物种类划分上有明显的分类学作用,因此,浮游藻类的鉴定与估计从传统的显微镜观察逐渐向分析藻类特征性光合色素的方面发展,而且随着色谱分析技术革新,特征光合色素分析成为研究浮游植物群落结构主要手段。近年来,虽然高效液相色谱法在分析光合色素的研究中有一定突破,但由于光合色素是一大类具有相似化学结构和极性的大分子化合物,因此在分析多种色素混合物上仍存在一定的问题。高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS/MS)可以通过监测特征离子峰来分析分离多种色素混合物,较之HPLC法具有一定优势,通过选择反应检测模式(SRM), HPLC-MS/MS方法不仅能够检测低浓度的光合色素,而且能够排除其他基质的干扰,改善分析的稳定性,有利于测定成分复杂的色素样品。目前国内外以HPLC-MS/MS方法对色素进行分析的报道相对较少,因此,本研究在传统液相方法的基础上,建立了20种具有化学分类学意义的光合色素的HPLC-MS/MS方法。应用HPLC-MS/MS方法对7个浓度的光合色素标准物质进行线性考察,发现大部分色素在该浓度范围内具有良好的线性(R>0.9507),方法的重现性较好(RSD%<5%),能够满足20种光合色素定性与定量的要求。将此方法应用于黄海北部近岸增养殖区(金石滩,大李家和大长山岛)光合色素的分析检测工作中。HPLC-MS/MS测定结果显示,三个地区均有12种光合色素被检出,从色素的种类可以初步判断,三个增养殖存在的浮游植物的种类为硅藻,甲藻,蓝藻和金藻。光合色素的数据经CHEMTAX软件计算,结果表明,三个地区的优势藻类类群均为硅藻和甲藻,其次是蓝藻和金藻。三个地区总生物量均值大小是大李家>金石滩>大长山岛,分别为2.703、1.506和1.182μg/L。结合同步测定的温盐状况,发现大李家地区甲藻的繁殖能力上升可能与较低营养物质的输入有关,与相关报道呈现一致性。光合色素HPLC-MS/MS分析方法的建立,为浮游植物群落结构研究提供了新的有力工具,应用该方法研究北黄海藻类分布状况也为日后开展海域调查提供基础数据。
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