研究目的 本研究在HEK293细胞上瞬时表达胎儿型（γ-nAChR）及成人型（ε-nAChR）两种肌肉乙酰胆碱受体亚型，比较琥珀胆碱对这两种乙酰胆碱受体亚型的作用，探讨在某些条件下，琥珀胆碱引起高血钾症的原因。研究方法1．利用分子生物学技术将编码m-nAChR亚基α、β、γ、δ、ε的cDNA分别重组于真核细胞表达质粒pcDNA3.1⁺上，用脂质体转染技术，将重组后的pcDNA3.1⁺α、pcDNA3.1⁺β、pcDNA3.1⁺δ、pcDNA3.1⁺γ或pcDNA3.1⁺ε按2：1：1：1的摩尔比导入HEK293细胞，使其细胞膜上表达γ-nAChR或ε-nAChR，这样建立了两种m-nAChR亚型的实验模型，用膜片钳记录细胞对乙酰胆碱的反应电流，对受体进行功能鉴定。2．①短时程给药：给予不同浓度的乙酰胆碱和琥珀胆碱5s，用全细胞膜片钳技术已录γ-nAChR和ε-nAChR的反应电流，比较EC₅₀和量效曲线；②长时程给药：给10μ M琥珀胆碱600s，建立并比较γ-nAChR及ε-nAChR对其反应的时效曲线。 研究结果1．转染pcDNA3.1⁺α、pcDNA3.1⁺β、pcDNA3.1⁺δ、pcDNA3.1⁺γ或pcDNA3.1⁺ε的HEK293细胞给予乙酰胆碱后产生内向电流，表明细胞成功表达了γ-nAChR或ε-nAChR。2．①短时程用药：乙酰胆碱对γ-nAChR及ε-nAChR的EC₅₀分别为13.1 μ M和18.6 μ M（P＞0.05）；琥珀胆碱对γ-nAChR及ε-nAChR的EC₅₀分别为58.3 μ M和75.9 μ M（P＞0.05）；琥珀胆碱对γ-nAChR和ε-nAChR的激动效能弱于乙酰胆碱，各约为乙酰胆碱四分之一。琥珀胆碱与乙酰胆碱相似，对γ-nAChR的EC₅₀均略低于对ε-nAChR的EC₅₀，对γ-nAChR的敏感性均较对ε-nAChR的敏感性稍高。②长时程用药：两种类型受体内向电流逐渐衰减，但ε-nAChR衰减迅速，而γ-nAChR衰减缓慢；在电流衰减期，加乙酰胆碱后，电流无变化。表明在琥珀胆碱持续存在的情况下，发生脱敏感的速度γ-nAChR慢于ε-nAChR。③门控的离子通道开放时间γ-nAChR较ε-nAChR长，导致γ-nAChR引起的跨膜离子移动量较大。博曰lJ4究生论文研究结论①唬泊胆碱对卜nAchR和。一nAchR均有激动作用，但敏感性不及乙酞胆碱;②唬拍胆碱激动受体引起的离子变化，丫一nAChR较。一nAChR大，可能是病理情况下肌细胞膜上乙酞胆碱受体上调时，唬拍胆碱引起细胞外钾离子浓度升高较大的原因;③玻伯胆碱长时间应用，。一叭ChR衰减迅速，易发生脱敏感阻滞，这可能是持续应用唬拍胆碱后影响肌张力恢复的重要原因。