核盘菌是一种世界范围内广泛分布的植物病原真菌,能够侵染油菜和大豆等多种农作物,造成严重的经济损失。核盘菌弱毒相关DNA病毒SsHADV-1可导致核盘菌出现严重的弱毒现象,感染该病毒后,核盘菌的致病力严重衰退,同时生长变慢、产生菌核的时间延迟、色素分泌不均匀等,表明SsHADV-1是一种具有防病潜力的病毒。核盘菌对SsHADV-1也具有反作用,如在培养过程中存在摆脱病毒的现象,这种现象使得利用真菌病毒控制作物病害存在潜在的风险。因此,需要对核盘菌与SsHADV-1互作的分子机制进行深入研究。为了明确核盘菌与SsHADV-1的分子互作机制,实验室前期利用Solexa(RNA-seq)技术建立了核盘菌受病毒初期侵染前后基因表达谱。本研究从上述表达谱中筛选到一个命名为Z91的基因,该基因在受病毒侵染后下调了 16倍。采用基因超表达和基因沉默技术对该基因在核盘菌与SsHADV-1互作过程中的功能进行了初步研究。取得了以下研究成果:1.Z91基因全长1498 bp,有3个外显子和2个内含子,编码具有410个氨基酸的假定蛋白,软件预测显示编码蛋白有Pal1和filament_head两个保守结构域。qRT-PCR试验发现Z91在核盘菌受病毒侵染1-3 h后下调了 10倍,表明该基因可能参与了核盘菌与SsHADV-1之间的相互作用。2.构建了 Z91基因的超表达载体和沉默载体,利用农杆菌介导转化Ep-1PNA367获得了该基因的超表达转化子和沉默转化子,实时荧光定量PCR检测后发现与出发菌株相比,Z91基因在超表达转化子中的表达量上升,在沉默转化子中表达量降低。3.生物学功能研究表明,超表达Z91基因对核盘菌的菌丝生长和致病力均无明显影响,但沉默转化子在菌丝生长速度和致病力两方面均有不同程度的下降,而且不能产生菌核,在高盐和高渗等逆境条件下沉默转化子的生长受到显著抑制。表明Z91与核盘菌的生长、致病力以及逆境抵抗能力等生物学特性相关。4.利用SsHADV-1病毒粒子直接侵染Z91基因的超量表达转化子和沉默转化子,发现在超量表达转化子中,SsHADV-1的复制没有受到显著影响,在沉默转化子中,SsHADV-1的复制受到了显著的抑制,只能依靠PCR扩增才能检测到病毒的DNA。因此,Z91基因可能在核盘菌与SsHADV-1互作过程中发挥了重要的作用。本研究初步证实了 Z91基因在核盘菌生长发育、致病和降低病毒SsHADV-1的DNA在核盘菌中积累的重要作用,作用机理有待进一步探究。