【摘 要】
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腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是重要的生物中间体.主要起转甲基、转硫、转氨丙基作用,通过临床给药来治疗抑郁症、关节炎、肝功能紊乱等疾病.体内的形成是由腺苷
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腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)是重要的生物中间体.主要起转甲基、转硫、转氨丙基作用,通过临床给药来治疗抑郁症、关节炎、肝功能紊乱等疾病.体内的形成是由腺苷甲硫氨酸合成酶(EC 2.5.1.6)催化腺苷三磷酸和甲硫氨酸反应生成.该文利用GAP启动子强化表达腺苷甲硫氨酸合成酶的Pichia pastoris生产SAM,在外加甲硫氨酸的条件下对发酵条件和分离纯化进行研究.通过摇瓶和5-L工作体积发酵罐的实验,研究了pH、溶解氧、铵离子、接种量等条件.实验结果表明:重组菌在pH5.0时生长旺盛,pH6.0可以使SAM在重组Pichia pastoris继续积累.溶解氧低时SAM积累高于溶解氧高时SAM的积累,优化接种量和发酵初始甘油浓度并且对铵离子浓度研究后,以添加尿素保持离子强度和含氮量,最后产量达到了4.30g/L.SAM产量达到10mL离心管产量的两倍.采用了有机试剂、酸处理的破胞方法.选用不同的树脂做分离实验,选用大孔弱酸性阳离子交换树脂D151.确定了上样量,最适pH(4~5),上样速度0.3mL/min,沈脱液为100mmol/L硫酸.分步洗脱后,再过离子交换树脂1×13.4脱盐、浓缩、有机试剂沉淀等方法,得到SAM产品,纯度达91.0％,
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