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目的:课题组前期基因芯片的结果发现:相比正常牙龈组织,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)TNFRSF13C(tumor necrosis factor receptor superfamily13 C,TNFRSF13C)在侵袭性牙周炎牙龈组织中的表达明显升高,表明其可能参与侵袭性牙周炎的发生发展。本研究旨在通过验证不同炎症状态的人牙龈组织中lncRNA-TNFRSF13C、Jun、SP1、TCF20和MMP-1、MMP-3的表达水平;体外细胞实验检测lncRNA-TNFRSF13C对Jun、SP1、TCF20和MMP-1、MMP-3的调节作用,初步探索lncRNA-TNFRSF13C在侵袭性牙周炎中的作用和调节机制,从而为阐明侵袭性牙周炎的发病机制提供新的理论依据。方法:1.经患者及其家属知情同意后,收集牙周健康人群及侵袭性牙周炎患者的牙龈组织,Tri Zol法提取总RNA,并利用实时定量荧光聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,real time PCR)检测不同炎症状态下牙龈组织中lncRNA-TNFRSF13C、Jun、SP1、TCF20和MMP-1、MMP-3的表达。2.经患者及其家属知情同意,收集就诊于天津医科大学口腔医院口腔颌面外科的全身健康志愿人群阻生齿拔除时的新鲜健康牙龈组织。组织块贴壁法培养人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs),取生长状态良好的第三代或第四代细胞,用不同浓度(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)的大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)或牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,P.g)的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)予以刺激,并在体外培养1d、3d、5d、7d后使用real time PCR检测HGFs细胞中lncRNA-TNFRSF13C、Jun、SP1、TCF20以及MMP-1、MMP-3表达水平的变化。3.构建lncRNA-TNFRSF13C过表达质粒,转染HGFs,检测细胞转染效率;并检测质粒转染后,上述因子的mRNA及蛋白分泌水平的变化。4.lncRNA-TNFRSF13C siRNA转染HGFs,检测细胞转染效率;检测siRNA转染后,上述因子的mRNA及蛋白分泌水平的变化。结果:1.相比健康的牙龈组织,侵袭性牙周炎患者牙龈组织中lncRNA-TNFRSF13C、Jun、SP1、TCF20以及MMP-1、MMP-3的表达明显升高。2.经过不同浓度和时间的E.coli LPS或P.g LPS刺激,lncRNA-TNFRSF13C、Jun、SP1、TCF20及MMP-1、MMP-3的表达均呈现不同程度的升高。3.sno-TNFRSF13C转染HGFs后,结果显示:相比空白载体组,sno-TNFRSF13C组中的lncRNA-TNFRSF13C表达显著升高,结果具有统计学差异(p<0.05);此外,sno-TNFRSF13C组中的Jun、SP1、TCF20和MMP-1、MMP-3的表达均显著升高(p<0.05)。4.lncRNA-TNFRSF13C siRNA转染HGFs后,结果显示:相比阴性对照组,si-TNFRSF13C组中的lncRNA-TNFRSF13C表达显著降低,结果具有统计学差异(p<0.05);此外,si-TNFRSF13C组中的Jun、SP1、TCF20和MMP-1、MMP-3的表达均显著降低,结果具有统计学差异(p<0.05)。5.ELISA检测分别转染si-TNFRSF13C和sno-TNFSRF13C后的HGFs上清液,结果显示:相比NC组,si-TNFRSF13C组的MMP-1、MMP-3蛋白水平均显著降低,结果具有统计学差异(p<0.05);相比空白载体组,sno-TNFRSF13C组的MMP-1、MMP-3蛋白水平均显著升高,结果具有统计学差异(p<0.05)。结论:1.炎性牙龈组织中的lncRNA-TNFRSF13C、Jun、SP1、TCF20以及MMP-1、MMP-3高表达,提示这些因子参与了侵袭性牙周炎的发病过程。2.lncRNA-TNFRSF13C能调控Jun、SP1、TCF20的活性,以及MMP-1、MMP-3表达水平,但调节机制需要进一步探索。