石榴皮多酚高效液相色谱指纹图谱研究

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临潼是全国最大的石榴生产基地之一,石榴资源丰富。石榴皮占石榴总重的30%左右,但是在石榴汁、石榴酒等食品加工中大部分却被丢弃了,资源浪费严重。研究证实石榴多酚具有良好的抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、调节血脂等功能。而在石榴各部分中,石榴皮中的多酚含量最高。作为一种具有良好应用前景的植物提取物,由于没有可遵循的国际标准、国家标准和行业标准,石榴皮多酚提取物的质量难以监控。本试验以临潼石榴为原料,以《中药注射剂指纹图谱的技术要求(暂行)》为标准,首次对石榴皮多酚的高效液相指纹图谱进行研究,以期为石榴皮多酚质量的监控提供有力的保障和可供参考的质量控制标准。研究成果如下:1.石榴皮多酚的高效液相色谱测定方法高效液相色谱测定石榴皮多酚色谱条件为:Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(5μm,4.6×250mm),紫外检测波长为280nm,柱温30℃,进样量20μL,以外标法定量。流动相A:水-冰醋酸(体积比为99:1),流动相B:甲醇。梯度洗脱程序:0~70min, B为5%~44%;70~80min,B为44%~44%,流速为1ml/min。2.临潼净皮甜石榴皮多酚HPLC指纹图谱的建立以安石榴苷色谱峰为参照峰,建立了临潼净皮甜石榴皮多酚HPLC指纹图谱,15个指纹峰构成了临潼净皮甜石榴皮特有的色谱指纹图谱特征。指纹图谱方法学考察结果和指纹图谱相似度评价结果均符合国家中药指纹图谱的标准。3.临潼主要石榴品种多酚的比较净皮甜、三白甜和大红酸是临潼主要的石榴品种。比较发现,大红酸的石榴皮中总酚含量最高,而三白甜中的安石榴苷和没食子酸含量高于大红酸和净皮甜。三个品种间的相似度均大于0.9,表明其石榴皮的醇提物化学构成很一致。4.市售石榴皮多酚提取物的质量检测及比较对两种以西安石榴为原料的市售石榴皮多酚提取物进行质量检测,发现其总酚含量比实验室自提石榴皮多酚低,其主要特点是安石榴苷含量很低,但鞣花酸含量相对较高。与临潼净皮甜石榴皮多酚HPLC指纹图谱共有模式进行相似度分析显示,三者间有19个共有峰,包括安石榴苷、表儿茶素和鞣花酸;但三者间相似度均小于0.900,表明其化学构成差异较大。
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