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研究背景:心力衰竭是多种心血管疾病的终末阶段,具有高死亡率、高费用、高致残率等特点,给个人和社会带来极大的负担。心室重构是心力衰竭的重要病理变化,心肌细胞凋亡是心室重构的关键机制之一,如何拮抗心肌细胞凋亡,逆转心室重构便成了治疗心力衰竭的指导方向。Wnt/β-catenin作为经典wnt信号通路,现有研究发现其参与了心肌细胞的肥大、凋亡过程,wnt3a作为wnt家族的一员,在心肌细胞中的作用机制复杂。survivin作为抗凋亡蛋白,已有研究发现survivin在心衰心肌细胞中具有保护作用,但其上游信号尚不清楚。研究目的:1、研究Wnt3a、β-catenin、survivin在心衰大鼠模型心肌细胞中的表达特点;2、研究Wnt3a、β-catenin、survivin在体外正常心肌细胞及DOX诱导的心衰细胞中的表达特点及相互作用关系;3、研究过表达wnt3a、survivin及干扰wnt3a在心衰细胞凋亡过程中的作用,并分析其可能的作用机制。研究方法:1、将21只大鼠随机分为三组,手术组、假手术组及空白组。手术组采用胸主动脉缩窄法制作心衰大鼠模型,假手术组开胸不结扎,空白组不做任何处理。所有大鼠定期检测心脏超声,待手术组心衰形成后处死所有动物,取心肌组织标本,行HE染色、免疫组化检测、western blot相关蛋白检测;2、构建过表达wnt3a、过表达survivin、干扰wnt3a的腺病毒,在体外培养原代心肌细胞,采用阿霉素(DOX)诱导法建立心衰细胞模型,分别转染不同腺病毒并设置对照组。用western blot法检测相关蛋白表达,用TUNEL法研究过表达wnt3a、过表达survivin、干扰wnt3a在心衰细胞凋亡过程中的作用。研究结果:1、手术组大鼠术后18周心衰形成。心肌组织HE染色结果可见手术组心肌细胞肥厚,排列紊乱,部分心肌细胞核大小不均匀,部分偏向一侧。免疫组化及western blot结果可见wnt3a、β-catenin、survivin及caspase-3在手术组的表达高于其余两组,特别是survivin与caspase-3在手术组表达远高于其他两组,Bcl-2在手术组的表达低于其余两组;2、分析细胞转染后western blot检测相关蛋白结果,过表达wnt3a与干扰wnt3a无论在正常心肌细胞还是DOX诱导形成的心衰细胞中均没有体现出对survivin表达的影响。过表达survivin在正常心肌细胞未表现出对wnt3a的影响,但在DOX诱导的心衰细胞中,过表达survivin减弱了 DOX对wnt3a表达的抑制作用。过表达survivin在正常心肌细胞体现了促进β-catenin表达的作用,在DOX诱导的心衰细胞中未见明显影响。过表达Wnt3a及survivin在正常心肌细胞均可以促进Bcl-2的表达,过表达survivin在DOX诱导的心衰细胞中可以减弱DOX对Bcl-2表达的抑制作用,过表达wnt3a没有体现相似的作用。过表达Wnt3a及survivin在正常心肌细胞均体现了抑制caspase-3表达的作用,同时在DOX诱导的心衰细胞中都减弱了 DOX对caspase-3表达的促进作用,干扰wnt3a则体现了相反的结果;3、过表达wnt3a和过表达survivin都具有抗DOX诱导的心衰细胞凋亡的作用,干扰wnt3a则作用相反。研究结论:1、心衰大鼠心肌中wnt3a、β-catenin、survivin表达上升可能是一种机体自我保护的正反馈机制;2、wnt3a与survivin均可以减少DOX诱导的心衰细胞凋亡,其作用机制可能有共同的下游通路且与caspase-3的下调有关,此外survivin的抗凋亡机制还可能包括Bcl-2的上调;3、心衰细胞中survivin可能在细胞膜外区域有更多不同作用,也许与细胞间直接转染及旁分泌有关。