【摘 要】
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目的:研究Klotho在人舌鳞癌Cal27细胞中潜在的作用及相关机制方法:1.人舌鳞癌Cal27和SCC-9细胞的细胞培养、传代、冻存、复苏等。2.蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)检测人舌鳞癌细胞——Cal27细胞和SCC-9细胞中相关蛋白的表达水平,如Klotho蛋白、β-链蛋白(β-catenin)、c-Myc蛋白和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)等。3.构建能够高表达
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目的:研究Klotho在人舌鳞癌Cal27细胞中潜在的作用及相关机制方法:1.人舌鳞癌Cal27和SCC-9细胞的细胞培养、传代、冻存、复苏等。2.蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)检测人舌鳞癌细胞——Cal27细胞和SCC-9细胞中相关蛋白的表达水平,如Klotho蛋白、β-链蛋白(β-catenin)、c-Myc蛋白和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)等。3.构建能够高表达Klotho蛋白的重组质粒,使得重组质粒具有一定的功能,能够在细胞中高水平表达Klotho蛋白。4.使用转染技术将重组质粒导入到细胞内,使其能够顺利进入细胞内并行使功能,且细胞依然存活,最终使得细胞能够高水平表达Klotho蛋白。5.细胞MTT(噻唑蓝)检测法(MTT比色法)检测Cal27细胞在转染后不同时间点的增殖能力。6.平板克隆形成实验检测Cal27细胞在不同时间点后的克隆形成能力以及增殖能力。7.流式细胞术(FACS)检测不同组Cal27细胞的凋亡率。结果:1.MTT实验中,Klotho过表达组的细胞增殖能力要低于对照组与空载组(p<0.05)。2.Klotho过表达组的克隆数明显少于对照组与空载组中的克隆数(p<0.05)。3.Klotho过表达组的Cal27细胞凋亡率明显高于对照组与空载组(p<0.05)。4.Klotho过表达组中Caspase-3蛋白的表达水平上升,β-catenin蛋白、c-Myc蛋白和Cyclin D1蛋白的表达水平明显降低(p<0.05)。结论:Klotho可通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制人舌鳞癌细胞增殖,并促进其凋亡。
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