【摘 要】
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【目的】:初步分析温胆汤干预肥胖痰湿证的作用机制与B4Galt7、Sc5d的启动子与其表达的内在联系,为肥胖及相关疾病痰湿证的防治提供新的思路与方法。【方法】:（1）肥胖痰湿证模型建立及温胆汤干预:本次实验采用高脂饮食诱导的肥胖痰湿证SD大鼠模型。将大鼠分为模型组与正常组,分别喂以高脂饲料和普通饲料。8周后,按照体重及lee’s指数,划分造模成功大鼠。将造模成功的大鼠分为4组:温胆汤高剂量组、中剂
【基金项目】
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国家自然科学（地区）基金,基于调控多信号通路基因启动子甲基化的靶群整合效应探讨温胆汤干预肥胖炎症状态的作用机制（81960851）； 江西省自然科学基金,面上项目,基于甲基化特征探讨肥胖痰湿证脂质代谢相关基因SC5D、B4Galt7的表达及温胆汤的干预作用（20202BABL206132）；
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【目的】:初步分析温胆汤干预肥胖痰湿证的作用机制与B4Galt7、Sc5d的启动子与其表达的内在联系,为肥胖及相关疾病痰湿证的防治提供新的思路与方法。【方法】:（1）肥胖痰湿证模型建立及温胆汤干预:本次实验采用高脂饮食诱导的肥胖痰湿证SD大鼠模型。将大鼠分为模型组与正常组,分别喂以高脂饲料和普通饲料。8周后,按照体重及lee’s指数,划分造模成功大鼠。将造模成功的大鼠分为4组:温胆汤高剂量组、中剂量组、低剂量组以及空白组,其中空白组和正常组大鼠给予纯水灌胃。干预4周。（2）温胆汤的减肥效果观察:药物干预期,每周记录大鼠摄食量,体重及体长,计算Lee’s指数;按照试剂盒步骤检测大鼠血清血脂指标;取大鼠腹腔脂肪组织制作成冰冻切片,镜下观察脂肪细胞胞内脂滴的面积。（3）Massarray技术检测B4Galt7、Sc5d基因启动子甲基化情况。（4）采用实时荧光定量聚合酶链反应（q RT-PCR）技术检测脂肪组织中B4Galt7、Sc5d的基因表达。（5）采用蛋白免疫印迹法（WB）检测大鼠腹腔脂肪组织中B4Galt7、Sc5d的蛋白表达。（6）数据整理及统计:整理分析实验数据,采用SPSS25.00软件进行数据的统计分析。【结果】:（1）高脂饮食造模结果:造模组大鼠体重增长速度及体重明显偏大,存在显著性统计学差异（P＜0.01）。将体重数据代入公式求得Lee’s指数后,可发现两组间存在显著性差异（P＜0.01）,提示肥胖痰湿证造模成功。（2）温胆汤干预结果体重及lee’s指数:空白组与正常组相比体重及Lee’s指数偏大（P＜0.05）;药物组大鼠与空白组比较,增长速度变慢、体重减轻（P＜0.05）,Lee’s指数有减小,但不存在统计学意义（P＞0.05）。血脂指标:空白组与正常组相比,血清中TC、TG、LDL-C含量较高（P＜0.05）药物组与空白组相比,温胆汤干预后大鼠血脂水平降低（P＜0.05）,均存在统计学意义;血清中HDL-C含量空白组低于正常组,温胆汤干预后,药物组HDL-C含量有升高,但不存在统计学意义（P＞0.05）。病理切片观察:空白组大鼠的脂肪细胞及脂滴面积高于正常组,温胆汤干预后药物组大鼠的脂肪细胞中脂滴聚集与空白组相比有降低。（3）DNA甲基化:B4Galt7:空白组与正常组比较,17个位点甲基化状态改变,其中有13个位点检测区的甲基化程度升高,4个位点检测区甲基化程度降低,空白组的甲基化程度总体高于正常组。温胆汤干预后,药物组的整体甲基化低于空白组。在B4galt7-34＿Cp G＿31位点表现出甲基化程度明显,但是组间差异不明显（P＞0.05）。Sc5d:空白组与正常组比较,有22个位点发生了甲基化改变,其中有11个位点甲基化程度降低,7个位点甲基化程度升高,空白组的整体甲基化情况低于正常组。温胆汤干预后,药物组整体甲基化高于空白组。同时,在Sc5d-29＿Cp G＿40.41位点甲基化程度明显,药物组与空白组相比,甲基化程度降低（P＜0.05）。（4）基因表达量:B4Galt7的表达组间无统计学差异（P＞0.05）;Sc5d:空白组与正常组相比表达增高（P＜0.05）;温胆汤干预后,药物组与空白组相比表达降低（P＜0.05）。（5）蛋白表达量:B4Galt7、Sc5d:空白组与正常组相比表达均增高（P＜0.001）;药物干预后,药物组与空白组对比表达均降低（P＜0.01）。（6）启动子甲基化与RNA、蛋白表达间的比较分析B4Galt7:空白组与正常组相比,基因启动子甲基化程度升高,RNA表达降低,蛋白表达升高。温胆汤药物干预后,基因启动子甲基化程度下降,但降幅不明显,RNA表达低于正常组,蛋白表达降低。但在B4galt7-34＿Cp G＿31位点,各指标表达结果展现出一致性。Sc5d:空白组与正常组相比,基因启动子甲基化程度降低,RNA表达升高,蛋白表达升高;药物干预后,药物组基因启动子甲基化程度升高,RNA表达降低,蛋白表达降低,结果表现出一致性。【结论】（1）肥胖与脂质代谢相关基因的DNA甲基化密切相关,肥胖痰湿证大鼠确实存在脂质代谢基因的DNA甲基化的异常。（2）温胆汤对于肥胖痰湿证的干预有着较好疗效,可以减轻肥胖大鼠体重,降低大鼠血清中血脂含量。通过脂类代谢基因Sc5d的DNA甲基化改变,调节胆固醇合成,影响脂类代谢,进而影响脂肪组织堆积,可能是温胆汤干预的作用机制之一。
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