日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE),简称乙脑,其病原体是黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)的乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),该病主要盛行于亚洲及西太平洋的部分国家和地区。JEV的感染周期、致病机制至今仍不清晰,但乙型脑炎是不容忽视的人兽共患病,病毒主要通过三带喙库蚊等传播,不仅可造成妊娠母猪流产、产死胎或弱仔,还造成公猪睾丸炎等。全世界有三十多亿人居住在易受JEV感染的地区,每年上报病例约67000例,死亡人数约20000人,其中30%~50%的乙脑病毒感染幸存者会出现永久性神经系统后遗症,因此,弄清JEV的致病机制十分必要。在JEV生命周期中会和许多宿主蛋白发生相互作用,挖掘这两者之间的关系对探索乙脑病毒的生命周期、致病机制、研制更好的抗病毒药物以及控制它的传播至关重要。本研究以乙型脑炎BJB毒株为研究对象进行实验研究时,发现Huh7细胞感染了BJB病毒之后,其宿主蛋白高速迁移率蛋白1(High mobility group box 1,HMGB1)的表达量会显著下降。HMGB1蛋白是一种DNA结合蛋白,进化保守,广泛存在于真核细胞,在细胞生长、增殖、死亡、免疫、炎症中均发挥着重要作用,并且细胞质中的HMGB1还可以和多种蛋白结合,参与细胞自噬、癌演进等过程。因此,本研究构建了pRE-HMGB1-Strep真核表达载体,在Huh7细胞上过表达HMGB1蛋白,发现BJB病毒的增殖受到了抑制;然后通过RNA干扰实验发现在Huh7细胞上沉默HMGB1蛋白后,BJB病毒的RNA水平和病毒滴度均显著上升;随后通过CRISPR/Cas9技术对Huh7细胞进行改造,筛选得到敲除HMGB1基因的细胞株KO-HMGB1-I,发现BJB病毒在敲除细胞株上的增殖明显增强,与Huh7沉默了HMGB1的结果相吻合。由此可以确定,HMGB1蛋白在Huh7细胞上的过量表达可以抑制BJB病毒的复制及增殖,而HMGB1蛋白的表达降低则会促进病毒的复制、增殖。而HMGB1在细胞质的表达上升会诱导自噬,而自噬程度的升高会抑制JEV的复制。本研究通过qPCR检测发现,BJB感染Huh7会抑制晚期糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation end products,RAGE)的mRNA水平,而HMGB1的表达量上升会恢复RAGE的表达,HMGB1的表达量下降会相应的降低RAGE的表达。而RAGE作为Huh7细胞的模式受体,可以和配体结合刺激活性氧的产生从而诱导自噬。因此,本研究推测HMGB1可能通过影响RAGE的表达从而影响自噬,最终影响BJB在Huh7上的复制、增殖。