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禽白血病抗原检测试剂盒是利用p27基因在禽白血病病毒不同亚群之间高度保守的特性,p27蛋白是病毒核心外壳的主要成分,是易于检测的病毒抗原,是制备群特异性抗体以及单抗的首选抗原。本研究即利用抗p27抗体成功研制出禽白血病抗原检测试剂盒。 对ELISA条件进行摸索,确定p27单抗最适的包被浓度为1.34ug/ml,封闭液为5%脱脂乳,封闭条件为37℃ 2h。样本反应时间为37℃,60分钟。HRP-兔抗p27的最适工作浓度为1:1200（浓度为0.86μg/ml）,酶标抗体反应时间为37℃,60分钟。底物确定为TMB,底物的配制包括底物浓缩液,底物稀释液,作用时间为室温15分钟。终止液的研制,选择1M H2SO4并进行适当的改进。根据已经建立ELISA方法及反应条件,确定阴阳性临界值为0.17。 用本试剂盒检测人肠杆菌、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡减蛋综合症病毒、鸡传染性法氏囊病毒等,OD值均小于0.1,判为阴性,证明p27单抗与其它病毒和细菌之间没有交叉反应。利用建立好的双抗体夹心ELISA法每天对同一对阴阳性样品测定6次,连续测定4天时间,被检测阳性样品和阴性样品OD值之间均无显著差异（P>0.05）,证明本方法重复性好。 用自制的禽白血病抗原检测试剂盒与美国IDEXX公司生产的禽白血病抗原检测试剂盒对276份蛋清样品进行检测,两者阳性符合率为100%。自制禽白血病抗原检测试剂盒和美国IDEXX公司生产的检测试剂盒做平行对比试验,两者测试结果呈线性关系,相关性试验说明自制禽白血病抗原检测试剂盒的检测结果已基本达到国外同类产品的水平。 已包被的酶标板,对同一份阴阳性样品进行检测,每隔俩月测一次,共测6次,测得阳性样品OD值保持在1.0左右,阴性样品OD值小于0.1,证明试剂盒保存期达到12个月,初步组装成试剂盒。本研究建立了一种经济、快速、准确的诊断方法,为基层进行禽白血病的净化提供了良好的技术手段,为试剂盒的商品化奠定了较好的基础。