1.研究背景: 鼻咽癌为我国常见的恶性肿瘤之一，我国的鼻咽癌发病人数占世界总数的80﹪左右。目前，放射治疗仍是最有效的治疗手段。5年生存率达到5096-60﹪。远处转移和局部复发已经成为治疗失败的主要原因。而一直以来，预测初治鼻咽癌患者预后的因素往往局限在部分临床指标上，包括男性、有无颅神经侵犯、疾病临床分期早晚、双侧淋巴结侵犯大小以及患者治疗效果等，但实际中，临床预后指标相同的病人也常常表现出不同的疾病转归，有的长期随访无疾病进展，有的治疗结束后较短时间内出现肿瘤转移，这就提示我们肿瘤个体生物学差异是影响预后的重要因素之一。但到目前为止，尚未发现临床适用的，可预测鼻咽癌转移或复发的生物学指标。 长期研究中人们发现肿瘤转移是基因调控下的多阶段、多因素的极为复杂的病理过程。而近年来，与肿瘤转移过程高度相关的蛋白及基因已成为肿瘤转移机制研究领域的热点，因为这些蛋白及基因不但使我们可以更深入的了解肿瘤转移的机理，更重要的是，它们有可能成为预测肿瘤患者预后的指标，并成为抗肿瘤转移的靶点，为人类攻克肿瘤难题带来希望。 Ezrin蛋白就是被发现与肿瘤细胞转移密切相关的蛋白分子之一。已有研究证实它在多种肿瘤组织中表达，其中大部分与患者不良预后相关。 Ezrin蛋白是连接于细胞膜和细胞骨架之间的ERM 蛋白家族(Ezrin，Radixin，Moesin，Merlin)成员之一，即是一种将细胞膜分子(如CD44、E-cadherin、ICAM22)与肌动蛋白-细胞骨架连接起来的桥接蛋白。这种连接，不但是结构上的，而且是功能上的。通过介导细胞膜与细胞骨架的连接，ezrin( ERM 家族) 在细胞的运动、迁移、有丝分裂和信号转导等生理功能中发挥重要作用。 Yu 等和Khanna 等在两个独立的研究中，均采用了基因芯片这种大通量筛查差异基因表达的方法，并选用了两种间叶来源肿瘤的、高低转移能力各不相同的细胞系作为实验对象。通过运用不同的数据处理方法，共同发现了ezrin这种与肿瘤转移高度相关的蛋白。Yu等将vi12基因(ezrin编码基因)转入低转移能力的细胞系，发现原来不会转移的肿瘤细胞转移能力大大提高，很容易形成肺转移灶，这说明ezrin蛋白的过表达可赋予肿瘤细胞高转移活性。更重要的是，在这两个研究中，都采用了诸如RNA干扰、发夹RNA、反义RNA等抑制ezrin表达的方法，结果两组研究均显示，在抑制了ezrin的表达后，原本具有高转移能力的细胞系转移能力大大下降，不能形成肉眼转移灶。这些实验结果表明，ezrin 不但足以导致肿瘤转移，而且对于肿瘤转移是必不可少的。 Ezrin 是否在肿瘤转移过程中发挥核心作用，目前尚不得而知，但是它参与多种不同来源肿瘤转移的事实，已通过大量实验得以证实．在大规模随访的基础上，利用实时定量PCR的方法，研究ezrin与骨肉瘤行保肢手术患者生存期之间的关系。初步结果显示，ezrin 的表达与患者生存期存在一定程度的负相关关系。并且在妇科肿瘤、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、高度恶性软组织肉瘤、食管癌等肿瘤中，ezrin的过量表达已被证实与肿瘤的转移有关。但有关Ezrin在鼻咽癌组织中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响的文献报道很少。 本实验旨在探讨ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达，深入研究ezrin表达水平与患者转移和无病生存的关系，从临床应用角度探索ezrin 成为鼻咽癌复发或者转移的分子标志物的价值。 2．方法: 2.1临床资料 回顾性研究中山大学肿瘤防治中心1999年1月至2003年1月鼻咽癌根治治疗结束获完全缓解病例105例，病理诊断均为鼻咽未分化型非角化癌。搜集临床资料：性别、年龄、EBV感染血清学指标、临床分期、治疗情况等。随访患者预后，结果包括了发生转移或复发的患者51例，无转移54例。 2.2免疫组化 我院病理科标本库搜集对应标本；采用免疫组化SP法检测随访患者原发病灶中ezrin表达情况，对组织表达情况评分。 2.3整理数据 统计分析应用SPSS 13.0统计软件包进行统计。Ezrin不同表达水平与患者随访过程中出现转移或复发等预后的相关性采用Spearman 等级相关分析及等级秩和检验。Ezrin蛋白表达与随访的患者无病生存时间的关联性采用Kaplan-Mcicr法分析及制图。分期及病毒血清学滴度不同的两组间ezrin表达差异比较采用x<2>检验。多因素对预后的影响采用Cox回归模型分析。 3．结果: 3.1 Ezrin蛋白表达与随访期间发生转移的关系 Ezrin强阳性、阳性表达的患者远处转移率(分别为66.6﹪，52.8﹪)显著高于ezrin阴性的患者的转移复发率(24.2﹪)，并且出现转移的患者相对于无疾病生存的患者，存在更高几率的ezrin蛋白过表达。 3.2 Ezrin蛋白表达与无病生存时间的关系 Ezrin蛋白阴性表达的患者平均无病生存时间65个月；阳性表达平均无病生存时间约49月；而ezrin强阳性表达患者平均无病生存时间为39月。三组患者无病生存率比较，总体差异显著，其中异常表达组的生存时间短于阴性组，两组差异有统计学意义。 3.3 Ezrin蛋白表达与患者总生存率的关系 在随访结束后我们共获得了75例患者长期(5年或以上)生存资料，这些患者肿瘤组织ezrin阴性表达24例，死亡6例，5年总生存率75﹪；阳性表达25例，死亡10例，5年总生存率约60﹪；而ezrin强阳性表达26例中死亡14例，5年总生存率46﹪。其中ezrin强表达组的总生存率明显低于阴性组，两组差异有统计学意义。 3.4 辅助治疗对ezrin蛋白表达与转移关系的影响 在未接受过放疗以外的辅助治疗的人群中，ezrin异常表达的患者远处转移率仍显著高于ezrin阴性的患者(58.8﹪Vs.20.8﹪)，差异有统计学意义。对于采取联合放化疗的综合治疗策略的患者，尽管就远处转移率而言，ezrin异常表达的患者组仍高于无表达组，但差异己无统计学意义。 3.5 Ezrin蛋白表达与临床分期、EB病毒血清学指标的关系 Ezrin蛋白异常表达与患者临床疾病分期以及EB病毒血清学标志包括EBVDNA-Ab中和率、VCA-IgA、EA-IgA滴度无明显相关性。但我们发现，临床局部晚期(Ⅲ，Ⅳa期)合并肿瘤组织ezrin蛋白阴性表达的25例病例在随访中有24﹪发生了远处器官转移(6/25)；相对比的是，晚期且肿瘤内ezrin高表达的30例在随访中有67﹪出现了局部复发或远处转移(20/30)，两者差异显著。 3.6 影响患者无病生存时间的多因素分析 采用Cox回归模型对可能影响患者无病生存的多个因素进行分析，这些因素包括年龄、TNM分期、T分期、N分期、EB病毒血清学标志EN-Ab、VCA-IgA以及ezrin蛋白。结果ezrin蛋白表达与患者无病生存具有独立相关性(P<0.05)。 4．结论: 4.1 肿瘤组织中ezrin蛋白的异常表达与鼻咽癌患者治疗结束后发生复发转移及生存时间相关，通过对肿瘤组织中该蛋白的免疫组化检测有可能预测患者预后。 4.2 辅助治疗，特别是1-3个疗程的化疗对ezrin异常表达患者不良预后有一定的干预作用，从而降低了远处转移率。 4.3 肿瘤组织ezrin蛋白表达检测联合传统预后指标对判断鼻咽癌患者复发转移风险更有价值。