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将H9N2亚型禽流感病毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心,纯化抗原免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,通过ELISA和HI筛选,建立了两株抗H9N2亚型禽流感病毒的杂交瘤细胞株IH6、3A4,其分泌抗体能力稳定,为针对HA蛋白的单抗,免疫球蛋白分别为IgG1和IgG2b。分泌的单克隆抗体与16株H9N2亚型AIV发生血凝抑制反应,而不与H5N1、H5N2亚型AIV及HIN1、H3N2 SIV发生反应,对鸡NDV、IBDV、EDSV及IBV也无交叉反应,表明该单抗具有AIV H9N2亚型特异性。IH6杂交瘤细胞培养上清和腹水HI效价分别为28、214;3A4杂交瘤细胞培养上清和腹水HI效价为28、216。这两株杂交瘤细胞分泌的抗体均有良好的热稳定性。腹水经辛酸硫酸铵纯化后,蛋白含量分别为19mg/mL、14.9mg/mL。此两种单克隆抗体的获得为H9N2亚型禽流感病毒的研究、流感快速诊断方法的建立奠定了基础。 利用所获得的单克隆抗体结合胶体金技术,在国内首次建立了用免疫层析（GICA）快速检测H9亚型禽流感病毒的试纸条检测方法。检测时,只需将试纸条插入待检样品,5min后观察结果。试纸条上检测区和质控区同时出现两条红线为阳性,只在质控区出现一条红线的为阴性。用此试纸条检测送检的16株H9N2AIV均为为阳性,对照的H5N1、H5N2AIV、SIV毒株及NDV、IBDV、EDSV、IBV均为阴性,试纸条对H9N2AIV纯化抗原最低检出量为23.37ng;含毒尿囊液的最低检出量为2个血凝单位。用此试纸条对H9N2AIV鸡胚繁殖动态进行检测,得知病毒在66-86h之间含量最高;用该试纸条对人工感染H9N2AIV SPF鸡的咽喉及泄殖腔进行检测,该试纸条呈阳性反应,而对照鸡为阴性,证明该试纸条具有很好的特异性、敏感性,该法操作过程简单、快速、方便、不需特殊仪器,5min内便可判定结果,大大缩短了常规实验室检测所需时间,尤其适用于基层实验室和现场应用。