目的:以乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核衣壳为靶点的药物筛选,目前尚缺乏简便有效的筛选细胞模型。直接检测核衣壳的方法中相对简便可靠的是非变性琼脂糖凝胶电泳(Native agarose gel electrophoresis,NAGE)。对于药物筛选而言,NAGE存在通量低和操作繁琐的问题。针对这些问题,设计构建一种新的类核衣壳快速检测体系。方法:将近红外荧光蛋白(Near-Infrared fluorescent protein,NIRFP)通过长的柔性接头融合到乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus core protein,HBc)上,转染细胞并检测红外荧光蛋白表达以及类核衣壳结构形成情况;制备重组慢病毒,构建四环素调控转录因子稳定表达细胞系293tTA,并以此细胞为基础,构建miRFP709-HBc稳定表达细胞系并筛选单克隆;用已知具有抑制HBV核衣壳形成的药物Bay 41-4109和Arbidol处理细胞,检测类核衣壳的变化,以测试该细胞模型用于药物筛选的可行性。结果:(1)两种近红外荧光蛋白与HBc融合表达时,miRFP709-HBc的信号强度显著高于IMRFP-HBc,且miRFP709-HBc能形成可被检测到的类核衣壳结构。(2)成功构建了四环素调控转录因子稳定表达细胞系293tTA,并以此为基础成功构建了四环素调控表达的miRFP709-HBc稳定细胞系293miRFP709-HBc。(3)Bay 41-4109和Arbidol处理293miRFP709-HBc细胞后,均能检测到类核衣壳结构的剂量依赖性变化。结论:成功构建了一种新的乙肝病毒类核衣壳检测体系,本体系较传统方法节省时间20h,完全省去转印和免疫杂交步骤,且无需任何抗体及转印、杂交相关试剂,适于作为靶向HBV核衣壳形成药物的第二轮筛选模型。本系统还可作为一种独立的筛选模型,直接用于筛选干扰核衣壳形成的化合物。由于其直观性,除了可以筛选那些导致核衣壳形成量变化的化合物以外,还可以筛选仅导致核衣壳构型改变(迁移速率改变)的化合物。