论文部分内容阅读
目的:研究长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lnc RNA)人肺腺癌转移相关转录本1基因(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)在非小细胞肺癌患者血清中的表达及MALAT1与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性。通过转染MALAT1-siRNA前后表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)野生型细胞株A549对吉非替尼敏感性的变化,探讨MALAT1与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂EGFR-TKI(Epidermal Growth Factor Receptor-Tyrosine Kinase Inhibitor)耐药之间的关系。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测90例非小细胞肺癌患者血清中MALAT1表达水平,并与30例肺良性肿瘤患者及30例健康体检者比较。分别检测四种非小细胞肺癌细胞株A549、H1299、95D、HCC827中MALAT1表达水平及对吉非替尼IC50,CCK法检测转染MALAT1-siRNA前后A549细胞对吉非替尼IC50变化,流式细胞术检测转染后A549细胞凋亡水平。结果:1.非小细胞肺癌患者与健康对照组相比,血清中MALAT1表达存在差异,且差异具有统计学意义(P<0.01);肺良性肿瘤患者与健康对照组相比,血清中MALAT1表达无差异(P>0.05)。MALAT1在非小细胞肺癌患者血清中的表达与其年龄、性别、吸烟、病理类型、肿瘤直径、远处转移等无相关性,与分化程度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、TNM分期(P<0.05)有关且差异有统计学意义。2.与HCC827(EGFR突变型)细胞株相比,MALAT1在A549(EGFR野生型)、H1299(EGFR野生型)、95D(EGFR野生型)细胞株中表达上调,差异有统计学意义。3.A549(EGFR野生型)、H1299(EGFR野生型)、95D(EGFR野生型)细胞株IC50值(39.43±4.43μM、26.93±0.67μM、25.27±1.94μM)明显高于HCC827(EGFR突变型)(0.006±0.01μM),差异有统计学意义。4.加入不同浓度吉非替尼的MALAT1-siRNA细胞的生长抑制率均高于相应浓度的NC细胞,MALAT1-siRNA组吉非替尼的IC50(9.6±2.95)明显低于NC组(29.91±2.94),A549细胞对吉非替尼的耐药性下降了2.12倍,差异有统计学意义。5.流式细胞术检测转染后吉非替尼作用48小时A549细胞凋亡结果显示,阴性对照转染组(NC)与MALAT1-siRNA转染组(M)平均凋亡率分别为9.20±1.85%、10.24±3.43%,转染阴性对照吉非替尼组(NC+G)与转染MALAT1-siRNA吉非替尼组(M+G)平均凋亡率分别为14.57±0.41%、21.48±2.47%,转染MALAT1-siRNA吉非替尼组(M+G)与转染阴性对照吉非替尼组(NC+G)相比凋亡率增加且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.非小细胞肺癌患者血清中MALAT1表达显著高于肺良性肿瘤患者及健康对照组,提示MALAT1在非小细胞肺癌患者血清中异常表达。血清中MALAT1的表达与患者年龄、性别、吸烟、病理类型、肿瘤直径、远处转移等均无关,与分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关,提示血清中MALAT1可以初步反映非小细胞肺癌疾病进展程度。2.MALAT1在非小细胞肺癌细胞株A549(EGFR野生型)、H1299(EGFR野生型)、95D(EGFR野生型)中表达水平显著高于HCC827(EGFR突变型),提示EGFR野生型细胞株中MALAT1较EGFR突变型细胞株高表达。3.A549、H1299、95D三种EGFR野生型细胞株对吉非替尼的IC50显著高于EGFR突变型细胞株HCC827,提示EGFR野生型细胞株对吉非替尼耐药,EGFR突变型细胞株对吉非替尼敏感。4.转染MALAT1-siRNA至A549细胞可抑制MALAT1基因表达,转染后可增加A549细胞对吉非替尼敏感性,提示MALAT1可在一定程度上逆转A549对吉非替尼的耐药。