论文部分内容阅读
吴茱萸Evodia rutaecarpa （Juss.） Beth.为芸香科Rutaceae吴茱萸属Evodia Forst.一种药用植物。果药用,能散寒、止痛、解毒、杀虫;种子可榨油;叶可提取芳香油或做黄色染料。本文以吴茱萸不同发育时期的花芽和花为实验材料,应用常规石蜡切片技术观察研究了吴茱萸雌雄配子体发育过程;利用组织化学染色技术,对吴茱萸雄蕊花药和雌蕊胚囊发育过程中多糖、蛋白等物质的积累消长情况进行了初步观察;采用水提醇沉法提取吴茱萸果实中粗多糖,在体外化学模拟条件下,测定粗多糖对羟基自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）和二苯代苦味酰肼基自由基（DPPH·）的清除作用;细胞培养板液体稀释法测定吴茱萸果实粗多糖最小抑菌杀菌质量浓度。同时,将吴茱萸果实多糖的抗氧化活性和抗菌抑菌活性与同属植物密楝果实多糖及Vc的活性进行了分析对比。结果可归纳如下:1.花的发育观察研究吴茱萸为顶生的聚伞状圆锥花序,单性花,雌雄异株或同株。花序直径7–12cm,密被锈色柔毛。小花序为聚伞花序,由3朵小花组成,若干小花序组成顶生的聚伞状圆锥花序。在部分小花序的顶端分化出1朵雄花,两侧的小花为雌花。但大多数小花序的顶端一般不分化出雄花,3朵小花均为雌花。花5基数,花苞片对生,细小,叶状或鳞片状;萼片宽卵形,长约1mm,被短柔毛;花瓣长圆形,长4–6mm,雌花的花瓣较雄花的花瓣大,内面被长柔毛。雄花雄蕊5枚,较花瓣长,花丝下部被柔毛,具退化子房,其顶端4–5裂;雌蕊通常5心皮,稀为4或6;花柱圆柱形,长约1mm,柱头宽头状,子房长圆形,有粗大油点。雌花中退化雄蕊鳞片状。蓇葖果紫红色,有粗大油点,顶端无喙,每果爿有种子1粒,种子卵球形,长5–6mm,黑色,有光泽,表面有小窝点。花期6–8月,果期9–11月。传粉者为意大利蜂和丽蝇。2.小孢子发生及雄配子体发育吴茱萸的花药具4个小孢子囊,刚形成的花药原基结构简单,外边是一层表皮细胞,其内是一群分裂活跃的分生细胞,在后来的发育过程中,花药4个角隅处的细胞分裂很快,形成4个裂瓣。每个裂瓣表皮细胞内分化出孢原细胞。各处的孢原细胞再进行平周分裂,形成初生周缘细胞和初生造孢细胞。初生周缘细胞再进行1次平周分裂和多次垂周分裂形成2层次生周缘细胞,2层次生周缘细胞继续生长,随后再各自进行一次平周分裂形成4层细胞。这4层细胞继续生长并分化,到最后花药壁发育完全时,花药壁从外向内依次是表皮,药室内壁（l层）,中层（2–3层）,绒毡层（1层）。花药壁的发生方式属于基本型,腺质绒毡层。初生造孢细胞经过有丝分裂,形成次生造孢细胞,然后次生造孢细胞发育成小孢子母细胞,小孢子母细胞经过减数分裂形成四分体,胞质分裂为同时型。四分体被胼胝质包裹,四个小孢子之间有胼胝质壁分隔,为四面体型。之后,四分体分开成为四个单核小孢子。小孢子进一步发育,形成二细胞型的成熟花粉粒。花药成熟后,同一裂瓣的两个小孢子囊相通,之后在相通处破裂。开裂后的花药壁仅剩纤维状加厚的药室内壁和残留的表皮细胞。在减数分裂之后的各发育阶段,雄配子体发育有不同程度的败育现象,因此,在许多成熟花药中形态正常的成熟花粉很少,花粉败育现象明显。3.大孢子发生及雌配子体发育雌蕊为5心皮5室,每个子房室有2个胚珠,中轴胎座,倒生型胚珠,双珠被,厚珠心。吴茱萸为单孢原起源,孢原细胞经过分裂形成周缘细胞和造孢细胞,周缘细胞进行平周和垂周分裂形成了珠心组织。造孢细胞直接形成一个大孢子母细胞。大孢子母细胞经过两次减数分裂形成四个大孢子,沿胚珠长轴排成一列,即线形四分体。靠近珠孔端的3个大孢子在分裂后不久退化,合点端的1个大孢子发育成功能大孢子。之后,功能大孢子经过三次有丝分裂,成为具有七细胞八核的寥型胚囊。合点端为三个反足细胞,在之后的胚囊发育过程中退化,珠孔端为两个助细胞和一个卵细胞,极核位于胚囊中央。在吴茱萸大孢子发生过程中,珠心顶端处一般只分化出一个孢原细胞,然而也有极个别胚珠中有双孢原现象。在雌配子体发育过程中的不同时期,也可见到败育现象。4.花中分泌囊的分化发育在早期的花芽中,花的各部分没有分泌囊分化,随后,在小花序总苞片上最先出现分泌囊。然后在花被片和花柄中分化出分泌囊。胚珠发生时,珠被中产生分泌细胞,但无分泌囊分化。胚囊成熟时期,在子房壁上有分泌囊原始细胞产生。在这群细胞的中央,有几个体积明显增大的细胞,最后这几个细胞解体,形成一个较大的腔室,此时周围的细胞变得层扁平,并不断溶解,间隙逐渐扩大,并形成圆形腔隙。成熟分泌囊直径50μm左右,在近成熟的果实中,分泌囊主要是要存在于果皮、果柄中。5.组织化学染色研究在吴茱萸大小孢子发生及雌雄配子体发育过程中,组织细胞内无颗粒状淀粉粒和蛋白质积累,但其细胞质内积累大量游离态多糖物质。在分泌囊周围的细胞中有较多被染成红色的淀粉粒,未观察到有蛋白质颗粒存在。6.果实多糖的体外抗氧化和抑菌活性研究吴茱萸果实中粗多糖对·OH、H2O2和DPPH·清除能力EC50分别为1.0mg/mL、0.1mg/ mL和0.8mg/ mL,表现出较强的清除活性。相比之下对H2O2和·OH清除活性尤其明显,而且在相同质量浓度下对H2O2的清除活性明显高于VC。抗菌实验表明,吴茱萸粗多糖的抑菌杀菌活性强于同属植物密楝粗多糖的活性。