蛋白包覆微晶技术是近些年新发展的一种固定化酶技术,该技术利用酶分子与可结晶物质快速脱水析出的方法制备固定化酶。本论文以脂肪酶为模型酶,利用蛋白包覆微晶技术与交联酶聚集体、分子印迹等技术相结合,制备新型固定化脂肪酶,显著提高了脂肪酶的活性和稳定性。将固定化脂肪酶用于催化麻疯树油和乙醇制备生物柴油的反应,主要研究内容如下:第一部分,研究蛋白包覆微晶固定化脂肪酶（PCMC）的制备和性质,并用于催化麻疯树油合成生物柴油。通过研究确定以K₂SO₄为赋形剂、丙酮为脱水剂制备固定化脂肪酶PCMC。在40 ^oC异辛烷中浸泡72 h后,PCMC活性还保持初始活性的70%;在80 ^oC的异辛烷中浸泡4 h后,PCMC活性为初始活性的81%;通过催化月桂酸与正辛醇的酯化反应,考察了脂肪酶PCMC的酯化性能,重复使用9次后,月桂酸转化率仍在61%以上。进一步优化了脂肪酶PCMC催化麻疯树油制备生物柴油的反应条件,得到的最佳条件如下:正己烷为溶剂,麻疯树油与正己烷摩尔比为1:2,醇油比为4:1,酶用量为20%（基于麻疯树油质量）,反应温度为50 ^oC,反应时间12 h。该条件下,生物柴油的最高产率为94%。第二部分,研究了交联蛋白包覆微晶固定化脂肪酶（CLPCMC）的制备和性质,并将CLPCMC应用于催化麻疯树油合成生物柴油。通过研究确定以苯醌为交联剂,交联剂浓度为10 mM,交联时间为2 h。进一步考察了CLPCMC的稳定性,在40 ^oC异辛烷中浸泡72 h,活性仍可保持初始活性的98%;在80 ^oC异辛烷浸泡4 h后,活性为初始活性的90%。将CLPCMC用于催化月桂酸与正辛醇的酯化反应,重复使用11次,月桂酸转化率仍可达到78%。进一步优化了脂肪酶CLPCMC催化麻疯树油制备生物柴油的反应条件,确定生物柴油的最优制备条件为:溶剂为正己烷,麻疯树油与正己烷摩尔比为1:2,醇油比为4:1,酶用量为20%（基于麻疯树油质量）,反应温度为50 ^oC,反应时间12 h。该条件下生物柴油的最高产率为93%,重复使用7次后,生物柴油的产率为59%。第三部分,研究了交联印迹蛋白包覆微晶固定化脂肪酶（IM-CLPCMC）的制备及性质。通过研究,确定以正癸酸为印迹分子制备IM-CLPCMC。与CLPCMC相比,IM-CLPCMC的催化活性提高53.8%。考察了IM-CLPCMC的在有机溶剂中的稳定性,在40 ^oC异辛烷中浸泡120 h,活性仍可保持初始活性的82%;在70 ^oC异辛烷中浸泡4 h后,活性为初始活性的72%。将IM-CLPCMC用于催化麻疯树油合成生物柴油的反应,进一步确定了最优反应条件如下:醇油摩尔比为4:1,反应温度40 ^oC,麻疯树油与正己烷摩尔比为1:2,IM-CLPCMC酶用量为20%（基于麻疯树油质量）,反应时间8 h,该条件下生物柴油的最高产率为95%。