【摘 要】
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满天星是石竹科石头花属多年生草本植物,是世界上用量最大的配花材料之一和全球十大畅销切花之一。目前满天星的新品种培育主要依赖于传统育种手段,由于重瓣满天星基本不育,满天星新品种创制的发展空间受到了严重限制。因此弄清楚满天星重瓣花形成机理,建立高效的遗传转化体系和基因编辑体系有助于打破传统育种方式,为满天星分子育种提供理论基础和技术支持。本文研究结果如下:EMS诱变试验表明野生型满天星小粉花种子用15
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满天星是石竹科石头花属多年生草本植物,是世界上用量最大的配花材料之一和全球十大畅销切花之一。目前满天星的新品种培育主要依赖于传统育种手段,由于重瓣满天星基本不育,满天星新品种创制的发展空间受到了严重限制。因此弄清楚满天星重瓣花形成机理,建立高效的遗传转化体系和基因编辑体系有助于打破传统育种方式,为满天星分子育种提供理论基础和技术支持。本文研究结果如下:EMS诱变试验表明野生型满天星小粉花种子用150 mmol/L EMS诱变时,处理的最佳时间为6 h。在用EMS处理了大批量种子后,从突变植株中筛选出了1个白花和2个粉花重瓣突变体。通过参考满天星基因组信息和其他物种中已知的MADS-box基因序列,进行多序列比对和构建系统发育树,在满天星基因组中找到了95个MADS-box基因,62个Ⅱ型MADS-box基因,ABCE类基因在满天星中的分布和数量与拟南芥中的相似,没有明显的基因扩张。与野生型满天星相比,两个重瓣商业品种(‘YX1’和‘YX4’)的C类基因AG在花发育阶段的表达量显著降低,而A、B和E类基因的表达量增加。根据满天星单瓣和重瓣ABCE类基因表达量的不同,建立了满天星花发育ABCE模型。通过基因克隆和序列比对分析发现重瓣花的AG基因相较于单瓣均有不同程度位点的突变。商业品种‘YX1’和‘YX4’中PETa基因的mi R172结合位点存在SNP(G-C),而单瓣和EMS诱变的重瓣突变体的mi R172结合位点并无变化。因此AG的基因突变和mi R172介导的AP2/PET表达调控共同作用于满天星重瓣花的形成。在满天星不定芽诱导试验中,当不定芽诱导培养基为MS+2.5 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂时,满天星‘YX4’的诱导不定芽产生的系数最高,可达4.14。在建立了良好再生体系的基础上,用含有p CAMBIA1301-220.6-Pg F3′5′H载体的农杆菌探索满天星遗传转化体系,发现满天星在预培养1 d、共培养5 d、农杆菌侵染10 min和AS浓度为30 mg/L的条件下,诱导芽再生的效果最好,而侵染时间的多少是影响不定芽形成的主要因素,同时在此过程中获得了281株幼苗,有38株能够检测出条带,阳性检出率为13.8%。但转基因满天星花色并没有变化,仍为白色。后续在满天星花瓣中瞬时转染细菌蓝靛素合成基因(idgs),发现局部可以表达出蓝色,因此通过遗传转化方法将其转入满天星中,并鉴定出了8株阳性苗。本研究还构建了PDS基因编辑载体,并用其建立了满天星基因编辑体系,总共鉴定了34株幼苗,T-DNA插入率为50%,由于样本量较少,并没有在其中检测到靶位点被编辑的情况,这与阳性植株叶片无白化现象相符。同时在此基础上构建了与重瓣花形成相关的AG基因编辑载体,并将其转入到野生型小白花满天星中,目前幼苗处于恢复培养阶段。
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