【摘 要】
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研究目的:本实验旨在研究不同低氧时间处理下的miR-486在人胚肺成纤维细胞中表达水平,探索mi R-486在特发性肺间质纤维化中的调控作用及机制。研究方法:1.将人胚肺成纤维细胞（MRC5细胞）培养、传代,用不同的低氧时间（0h、6h、12h、24h、48h）进行处理,用q RT-PCR检测mi R-486、纤维连接蛋白（fibronectin FN）、α-血管平滑肌肌动蛋白（Smooth mu
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研究目的:本实验旨在研究不同低氧时间处理下的miR-486在人胚肺成纤维细胞中表达水平,探索mi R-486在特发性肺间质纤维化中的调控作用及机制。研究方法:1.将人胚肺成纤维细胞（MRC5细胞）培养、传代,用不同的低氧时间（0h、6h、12h、24h、48h）进行处理,用q RT-PCR检测mi R-486、纤维连接蛋白（fibronectin FN）、α-血管平滑肌肌动蛋白（Smooth muscle actinα-SMA）等基因表达水平。2.用过表达及沉默mi R-486慢病毒将MRC5细胞进行转染,检测mi R-486过表达/沉默后,FN、α-SMA、Collagen I、CollagenⅢ等表达水平。3.用双荧光素酶报告基因实验检测成纤维细胞生长因子9（FGF9）是否为mi R-486靶基因。并将MRC5细胞进行FGF9沉默,用q RT-PCR检测与之相关基因表达水平。研究结果:1.随着低氧时间延长,mi R-486表达逐渐降低,而FN、α-SMA等特发性肺间质纤维化相关基因表达逐渐升高,差别均有统计学意义（P＜0.05）。2.过表达mi R-486能抑制FN、α-SMA、Collagen I、Ⅲ等特发性肺间质纤维化相关基因的表达,而沉默mi R-486时,上述结果则相反。3.双荧光素酶报告基因实验检测FGF9为mi R-486靶基因,且无论是在蛋白水平还是m RNA水平过表达mi R-486后FGF9表达为降低,而沉默mi R-486后FGF9表达则为升高。4.沉默FGF9后FGF9及FN、α-SMA、Collagen I、Ⅲ等肺间质纤维化相关基因的表达为下降。研究结论:1.低氧通过下调miR-486、上调FN、α-SMA参与特发性肺间质纤维化发病过程。2.mi R-486是一种与低氧相关的微小RNA,通过调控FN、α-SMA、CollagenⅠ、Ⅲ,参与IPF的发病过程。3.FGF9为mi R-486靶基因,FGF9沉默表达时可以下调FN、α-SMA、CollagenⅠ、Ⅲ等表达。
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