川南地区蠕形螨的超微结构观察、基因组DNA遗传多态性初步分析及百部酊萃取液对虫体体外作用的实验研究

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目的:(1)对人体蠕形螨的超微结构进行细致、精准的形态学观察。(2)研究川南地区人体蠕形螨基因组DNA的多态性,探讨媒介按蚊与人蠕形螨遗传基因间的相互关系。(3)研究百部酊萃取液对人蠕形螨的体外杀灭作用及其药物安全性。方法:(1)采用5ug/ml碘化丙啶(propidine iodide,PI)对虫体进行荧光染色,避光染色15min,分别置于荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察;2.5%戊二醛固定虫体标本,梯度酒精和叔丁醇脱水,金喷镀后扫描电镜观察。(2)设计5条随机引物,应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA, RAPD)技术对微小按蚊、大劣按蚊与毛囊蠕形螨基因组DNA进行随机扩增,扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后分析。(3)采用透明胶纸粘贴法固定蠕形螨,在胶纸与玻片间喷加药物,观察百部酊萃取液对人蠕形螨的体外杀灭作用。采用百部酊萃取液对豚鼠皮肤、角膜给药,观察有无过敏反应,测定药物安全性。结果:(1)荧光显微镜下虫体与碘化丙啶有很强的结合力,荧光信号均匀分布于虫体细胞表面,充分展现虫体形态;扫描电镜更加清晰、细致地展示人体蠕形螨的超微结构;激光共聚焦显微镜将虫体分层扫描,并将图象进行三维重建,真实、完全、直观地展示蠕形螨三维立体形态。(2)5条随机引物对两种按蚊和毛囊蠕形螨扩增的条带数不同,其中两种按蚊对P2扩增的效果较好,而毛囊蠕形螨在P4扩增的效果较好。引物P2对微小按蚊在150、600、1300 bp扩增出3条带,大劣按蚊在100~500 bp扩增出一段明亮弥散条带。引物P3对微小按蚊在200 bp扩增出1条带,大劣按蚊在100~400 bp扩增出一段明亮弥散条带,毛囊蠕形螨在200、300bp扩增出2条带。引物P4对微小按蚊在150、400、500、750 bp扩增出4条带,大劣按蚊在100~400 bp扩增出一段明亮弥散条带,毛囊蠕形螨在200、400、600bp扩增出3条带。引物P5对微小按蚊在200 bp扩增出1条带,大劣按蚊在100~400 bp扩增出一段明亮弥散条带。大劣按蚊、微小按蚊和毛囊蠕形螨三者相似带型共2条(200、400 bp)。(3)百部酊萃取液作用3h蠕形螨开始死亡,作用6h全部死亡,动物药敏试验阴性。结论:(1)荧光显微镜,扫描电镜,激光共聚焦显微镜均能很好的展示人体蠕形螨形态特征,而激光共聚焦显微镜更能展示虫体的三维图像。(2)按蚊和蠕形螨两种节肢动物在遗传学上既存在近缘基因,也存在较大基因差异。(3)百部酊萃取液具有直接杀螨作用,安全有效。
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