血液系统Prkαcα基因敲除模型的建立及其主要影响因素的探讨

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目的:  通过移植小鼠胎肝细胞(FLCs),建立血液系统 Prkαcα(Protein kinase, c AMP dependent, catalytic, alpha)基因敲除小鼠模型并探讨影响该模型建立的主要因素。  方法:  将 Prkαcα基因敲除的杂合子小鼠杂交,获得适龄胎鼠,分离胎肝制成单个肝细胞悬液,一对一回输给经致死剂量辐照4h后的野生型受体小鼠。聚合酶链式反应( PCR)鉴定供体基因型。 Western blot检测重建后血液系统 Prkαcα蛋白表达。实验分为,受体小鼠移植前辐照剂量:8.5Gy、9.5Gy、10.5Gy;供体胎龄:13.5、15.5、17.5、19.5天;胎肝细胞回输方式:经眼球后静脉窦回输、经尾静脉回输。观察并统计30天内小鼠的存活情况。  结果:  使用辐照剂量分别为8.5Gy、9.5Gy、10.5Gy的移植存活率依次为(100%、91%、78%),差异具有显著统计学意义(P<0.05);接受8.5Gy的辐照剂量及 Prkαcα-/-FLC建立的小鼠模型血液系统中仍有少量 Prkαcα蛋白表达,接受9.5Gy、10.5Gy的辐照剂量及 Prkαcα-/-FLC建立的小鼠模型血液系统无 Prkαcα蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。在辐照剂量均为9.5Gy的条件下,使用胎龄为(13.5天、15.5天、17.5天、19.5天)来源的胎肝细胞进行移植,存活率依次为(89%、91%、88%、89%),差异无显著统计学意义(P>0.05)。经眼球后静脉窦回输方式获得的移植成功率(91%)与经尾静脉回输方式获得的移植成功率(80%)相比较,差异有明显统计学意义(P<0.05)。  结论:  使用9.5Gy的辐照剂量,胎龄为13.5天、15.5天、17.5天、19.5天胎鼠肝细胞,一对一经眼球后静脉窦回输,进行胎肝细胞移植,可简单有效得建立血液系统 Prkαcα基因敲除小鼠模型。
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