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背景:近年来,中国卵巢癌的发病率不断增加。由于早期卵巢癌缺乏典型症状和成熟的诊断,发现时一般已处于晚期。目前,对于癌症治疗手段非常有限,单靠手术,放疗化疗切除卵巢癌,效果很不理想。因此,迫切需要寻找一种新型的卵巢癌治疗手段。目前研究发现,免疫治疗能在肿瘤临床治疗中发挥巨大作用。溶瘤腺病毒是一种较为常见的免疫治疗方法,可以提高针对肿瘤细胞的免疫治疗作用。溶瘤腺病毒是经过基因工程改造,能特异性感染肿瘤细胞并且能在肿瘤细胞中完成自我复制,导致肿瘤裂解的增殖型腺病毒。这种病毒缺乏正常细胞复制所必须的基因,所以对正常细胞不产生杀伤作用。CD47是一种细胞表面分子,是免疫球蛋白(Ig)超家族的一员,可以和整合素,血小板反应蛋白等蛋白结合,并参与细胞迁移,T细胞和树突细胞(DC)的激活,轴突发展等不同的生理过程。CD47和免疫逃避有关,能在很多肿瘤细胞表面高表达,其机制是和巨噬细胞表面SIRPα结合后,可以释放“别吃我”信号,从而逃避巨噬细胞的吞噬作用,实现免疫逃避的目的。信号调节蛋白α(SIRPα)是抑制性受体,SIRPα表达相对受限于骨髓细胞,比如巨噬细胞,粒细胞,树突细胞等。SIRPα是参与调解白细胞功能的膜蛋白成员之一,CD47是其配体,两者构成SIRPα-CD47途径。在SIRPα-CD47途径中,表达于巨噬细胞表面的SIRPα和肿瘤细胞表面的CD47结合,将其识别为“自我细胞”,从而抑制了巨噬细胞的吞噬作用。SIRPα-CD47还能使巨噬细胞识别正常细胞和受损、老化细胞,使这部分细胞被清除。结果:在本研究中,构建携带SIRPα(CV1)-Ig G1 Fc基因片段的溶瘤腺病毒SG635-SF,考察其对人卵巢癌细胞体外模型,裸鼠卵巢癌移植瘤体内模型的治疗效果。主要结果有以下6方面。1、成功构建溶瘤腺病毒SG635-SF。通过分子克隆技术成功构建了p74-TP-CCAU-SF质粒,包装成35型SG635-SF溶瘤腺病毒。2、SG635-SF溶瘤腺病毒能表达SF基因片段。Western Blotting,ELISA实验结果表明,SG635-SF溶瘤腺病毒能成功表达SF融合蛋白。3、溶瘤腺病毒SG635-SF在卵巢癌细胞SK-OV-3,HO8910中有较强的增殖能力和杀伤作用。病毒增殖实验说明,SG635-SF和对照病毒SG635能在人卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3细胞中有效增殖,在48h时,增殖效率为100倍。MTT实验说明,相比于溶瘤腺病毒SG635,带外源基因SF的溶瘤腺病毒SG635-SF对人卵巢癌细胞有着更好的杀伤作用。4、融合蛋白SF能结合并封闭CD47。溶瘤腺病毒SG635-SF感染细胞后,依据流式细胞仪结果和免疫荧光显微镜结果我们发现,SF融合蛋白能结合并封闭卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3表面的CD47。5、溶瘤腺病毒SG635-SF能诱导人卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3凋亡。用增殖型SG635,SG635-SF,非增殖型Ad-SF,Ad-blank感染HO8910细胞后,发现增殖型SG635-SF感染的细胞凋亡明显,说明,封闭人卵巢癌细胞上的CD47的确能有效引起该细胞凋亡。6、在体内实验中,溶瘤腺病毒SG635-SF和SG635能抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生长。在裸鼠皮下注射人卵巢癌细胞HO8910,建立移植瘤模型,用溶瘤腺病毒SG635-SF,SG635进行治疗,结果数据对比显示,溶瘤腺病毒能抑制肿瘤生长,并且SG635-SF效果良好,说明溶瘤腺病毒SG635-SF在裸鼠体内有一定的抗肿瘤作用。结论:成功构建溶瘤腺病毒SG635-SF,能有效感染人卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3,并表达携带的外源基因SF,SG635-SF在人卵巢癌细胞中能有效增殖并对细胞产生杀伤作用,同时能结合并封闭CD47,体外促进人卵巢癌细胞的凋亡,抑制细胞生长;体内抑制人卵巢癌移植瘤的生长,并有效激活免疫反应,为建立肿瘤治疗提供新的策略。