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目的本课题拟通过体内、体外实验证实松果菊苷抗乳腺肿瘤的能力,并探究其可能的作用机制。方法首先,通过采用MTT试验,克隆形成试验,划痕试验,侵袭以及迁移试验,以不同浓度的松果菊苷处理乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468,综合判断松果菊苷的抗乳腺肿瘤能力。然后,通过采用荧光素酶报告基因系统,检测松果菊苷对不同信号通路的抑制或激活效应。并在此结果基础上,我们以不同浓度的松果菊苷处理MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞,收集细胞并提取蛋白,western blotting检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达;同时收集细胞提取RNA,并反转录后采用实时荧光定量PCR检测相关靶基因的表达,综合判断松果菊苷对Wnt/β-catenin信号通路的抑制效果。进一步,我们以MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型评估松果菊苷的体内抗肿瘤能力,并验证了其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制效果。结果通过采用MTT试验,克隆形成试验,划痕试验,侵袭以及迁移试验,我们发现松果菊苷能呈浓度依赖性的抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞系细胞增殖能力,细胞侵袭以及迁移能力,充分表明松果菊苷在体外试验中有着显著的抗乳腺肿瘤能力。接着,通过荧光素酶报告基因系统试验,我们发现松果菊苷能显著性的抑制Wnt1所诱导的TopFlash报告基因活性增强,而对NFATc所激活的NFAT报告基因活性并无明显抑制作用,推测松果菊苷可能通过特异性抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥抗乳腺肿瘤效应;为了进一步验证松果菊苷抑制Wnt/β-catenin信号通路的能力,我们用不同浓度的松果菊苷处理MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺癌细胞系,并通过western blotting试验检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达,发现,松果菊苷处理后呈浓度依赖性的降低磷酸化LRP6(s1490),LRP6,磷酸化以及非磷酸化DVL2,活化的β-catenin(ABC)以及总的β-catenin。并通过检测Wnt/β-catenin信号通路相关著名的靶基因,我们发现,松果菊苷能显著性降低LEF1,CD44,cyclin D1的mRNA和蛋白水平,综合以上结果我们判断松果菊苷能显著降低MDA-MB-231和MDA-MB-468乳腺肿瘤细胞系Wnt/β-catenin信号通路。最后,我们采用MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型评估了松果菊苷在体内的抗乳腺肿瘤能力,并同时检测了其对MDA-MB-231移植瘤Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用,我们发现松果菊苷明显抑制了MDA-MB-231裸鼠移植瘤的生长,同时伴随着对Wnt/β-catenin信号通路的显著性抑制。结论我们的研究证实了松果菊苷在体外及体内均能显著抑制乳腺肿瘤细胞的发生与发展,并且其可能的作用机制是通过降低Wnt/β-catenin信号通路的活化。基于我们的研究结果,我们认为松果菊苷是一种很有潜力的抗乳腺肿瘤药物,这将为以后的临床研究与肿瘤治疗提供很好的理论依据与实验基础。