SDF-1/CXCR4对大鼠骨髓基质细胞迁移的影响及在脊髓损伤中的应用

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SDF-1/CXCR4对大鼠骨髓基质细胞迁移的影响及在脊髓损伤中应用 目的 骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)体外分离培养后,在一定的诱导条件下,具有向成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多向分化的能力。其不但可被诱导分化成各种神经细胞及神经胶质细胞,而且更能通过分泌各种细胞因子起到对局部组织、细胞的营养、保护作用。目前研究发现SDF-1/CXCR4对干细胞动员、迁移、细胞归巢起到重要作用,已知CXCR4在造血干细胞、CD34+等细胞中高度表达,组织释放的趋化因子以及相关物质通过干细胞表面黏附分子以及CXCR4信号途径来起作用,最终成功指导干细胞归巢,同时归巢过程中又协助干细胞成功跨越内皮细胞。在组织缺血,细胞受损等疾病可分泌SDF-1等细胞因子,诱导干细胞向受损组织迁移。脊髓伤后释放大量细胞因子,如白介素,SCF,GM-CSF,C-CSF,M-CSF,SDF-1等,有可能对BMSCs起到诱导迁移作用。虽然CXCR4在造血干细胞中的表达是肯定的,但在BMSCs中表达程度尚有争论。SDF-1/CXR4系统对BMSCs迁移与增殖的作用更需进一步研究。基于上述已有的成果和面临的问题,本研究着眼于CXCR4在BMSCs中表达以及SDF-1对BMSCs的趋化作用;并且应用于活体,即受伤的脊髓组织中,观察SDF-1对植入BMSCs存活及及迁移的影响。 方法 取SD大鼠股骨和胫骨骨髓腔冲洗细胞,利用BMSCs贴壁生长的特性将其分离纯化,进行原代、传代培养;取生长状态良好的第2-5代细胞行生长曲线测定,CCK-8试剂检测活性。使用免疫组织化学对BMSCs鉴定及检测BMSCs细胞表面CXCR4;RT-PCR检测CXCR4mRNA表达;SDF-1对BMSCs迁移能力的影响使用微孔隔离室穿越实验评定:Transwell板上
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