叶黄素的超声皂化制备工艺及高速逆流色谱纯化的研究

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叶黄素是一种天然色素,易在光照、空气存在的条件下发生氧化反应。叶黄素的抗氧化功能使其具有多种药理活性,在自然界中大多以叶黄素酯的形式存在。但是在人体内,叶黄素酯的吸收利用度较低,叶黄素酯通过皂化反应转化为叶黄素后,人体的吸收利用率有显著提高。本文以万寿菊颗粒为提取原料,应用超声波技术、高效液相色谱技术、质谱技术、高速逆流色谱技术以及细胞生物学技术对叶黄素的提取、纯化、鉴定、抗氧化活性进行了系统研究,研究内容包括以下几个方面:1、通过超声皂化反应与水浴皂化反应的比较,发现超声皂化反应用时短,效率高,且皂化反应完全;采用四因素三水平正交试验,优化超声皂化的最佳工艺条件,确定超声皂化20min,KOH浓度为1.5mol/L,料液比为1:10,皂化温度为50℃时,叶黄素产率最高,产率为1.420%以上。2、采用质谱技术鉴定超声皂化前后提取物成分;根据2010版中国药典附录中规定的中药质量标准分析方法的验证指导原则,进行高效液相色谱法测定叶黄素含量的方法学考察,以及超声皂化产物的稳定性考察。3、采用高速逆流色谱技术制备了叶黄素纯品。叶黄素极性较小,根据其极性选择适宜的两相溶剂系统进行高速逆流色谱分离试验,实验结果表明,采用正己烷:乙醇:水的溶剂系统,在150min内各峰分离度良好,能够分离得到叶黄素纯品,纯度可达99.0%以上。4、选择非洲绿猴肾细胞(VERO细胞)进行叶黄素的抗氧化功能试验,利用H2O2建立氧化损伤模型,考察不同浓度的叶黄素对细胞存活率的影响。实验结果证明,在氧化损伤的同时加入叶黄素,细胞存活率有显著性提高,叶黄素能够保护VERO细胞,减小H2O2的氧化损伤作用。该论文确定了超声皂化法制备叶黄素的工艺,以及逆流色谱纯化方法,并进行了初步的质量标准和稳定性及抗氧化活性研究,为深入开展叶黄素的开发研究提供了参考。
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