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目的随着人口老龄化加剧,我国骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发病率连年攀升。当下急需一种方便有效且有利于大面积开展的预防措施。逆针灸作为中医治未病的典范,有简、便、效、廉的特点,具有适应国家预防OP战略的潜质。近年以来对于OP的逆灸研究有不错的成果,但对于穴位的研究不够深入,这给临床应用带来了不便。本研究以骨密度、骨小梁结构与激素水平为切入点,旨在探讨逆灸不同腧穴对去卵巢诱导的OP模型大鼠骨量与骨结构的影响,寻找逆灸防治OP的关键穴位与探究逆灸不同穴位对于内分泌及骨代谢的影响,以期为促进、推广逆灸防治OP提供科学的实验依据。方法购买SPF级6月龄雌性Sprague Dawley大鼠60只。于SPF级动物房适应性饲养7 d后,将60只大鼠随机编号,将末位数为1和6,2和7,3和8,4和9,5和0分别设为空白组,假手术组,模型组,胃俞组,肾俞组,每组12只。模型组、胃俞组、肾俞组运用去卵巢法制备骨质疏松症模型,假手术组仅切除双侧卵巢旁的部分脂肪,余处理同模型组。术后70天,取1~10号,31~40号大鼠右侧股骨,采用双能X射线骨密度仪进行检测,以验证造模是否成功。手术第三天起,对11~30号与41~60号大鼠进行干预。空白组、假手术组、模型组行常规抓取与自制鼠衣固定,胃俞组和肾俞组备皮后分别于胃俞穴/肾俞穴上方1~2cm处悬灸,20min/天,6次1疗程,疗程间休息1天,共治疗12疗程。使用双能X线吸收法检测股骨骨密度(BMD),HE染色法观察骨质形态,Micro-CT检测骨小梁数量、连接密度、分离度、结构模型指数、各向异度、骨小梁模式因子、结构模型指数,全自动生化分析仪检测尿钙(Ca)、尿磷(P)、尿肌酐(Cr)水平,ELISA法检测血清雌二醇。结果1.肾俞组和胃俞组均能改善去卵巢诱导的骨质疏松模型大鼠骨密度,且肾俞组保护效果强于胃俞组。胃俞组与肾俞组有减少去卵巢诱导的骨质疏松模型大鼠股骨松质骨丢失的趋势。(1)双能X线吸收法检测结果:对比模型组,胃俞组与肾俞组的骨密度出现了明显的提高(P<0.05),而胃俞组与肾俞组之间比较也出现了差异,肾俞组的骨密度高于胃俞组(P<0.05)。说明逆灸肾俞穴预防去卵巢模型骨质疏松症大鼠骨密度降低作用强于胃俞穴。(2)HE染色结果:骨皮质比较:各组之间骨皮质厚度与形态无明显差异,内骨板、外骨板与间骨板并未出现明显的断裂与空隙,穿通管结构完整形态正常,整体骨质致密;说明去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠对骨质的影响较小。骨松质比较:与假手术组相比,模型组骨小梁断裂断裂口增多,骨小梁间间歇距离增大,且中部出现骨小梁缺失,呈现骨质疏松样趋势;与模型组比较,胃俞组与肾俞组骨小梁断裂口减少,骨小梁间间隙距离变小,中部存在骨小梁分布,且骨小梁缺失面积减少。说明逆灸胃俞穴和肾俞穴有抑制去卵巢诱导的骨质疏松模型大鼠股骨松质骨丢失的趋势。2.胃俞组和肾俞组均能防治去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠骨质流失,且肾俞组优于胃俞组。胃俞组与肾俞组均能保护去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠的骨结构,且肾俞组优于胃俞组。(1)骨体积分数结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨体积分数严重缩小(P<0.05),说明趋势诱导的骨质疏松症模型大鼠骨质流失严重。与模型组比较,胃俞组和肾俞组骨体积分数明显提高(P<0.05),说明逆灸胃俞穴与肾俞穴皆能提高去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠骨量。与胃俞组比较,肾俞组骨体积分数更高(P<0.05),说明逆灸肾俞预防去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠骨量丢失的作用强于胃俞。(2)骨结构参数结果:与空白组比较,假手术组大鼠股骨骨小梁骨微结构指标,差异无统计学意义(P>0.05)。说明仅手术创伤导致的应激et al生理变化不会对股骨骨骺下骨小梁富集区的骨结构产生重大破坏。与假手术组比较,模型组大鼠股骨骨小梁厚度、骨小梁数量和骨小梁连接密度均明显减少(P<0.05)骨小梁分离度、骨小梁模式因子、模型结构指数均升高(P<0.05);说明去卵巢后导致的雌激素变化能对股骨骨骺下骨小梁富集区的骨结构产生明显的破坏。与模型组比较,肾俞组大鼠股骨骨小梁厚度、骨小梁数量和骨小梁连接密度均明显升高(P<0.05),骨小梁分离度、骨小梁模式因子模型结构指数均降低(P<0.05),胃俞组大鼠股骨骨小梁厚度升高(P<0.05),各项骨结构指标无统计学差异(P>0.05);说明逆灸肾俞穴能改善去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠股骨骨松质结构破坏,而胃俞穴仅能改善该模型大鼠股骨骨松质骨小梁厚度。与胃俞组比较,肾俞组大鼠股骨骨小梁数目、骨小梁连接密度均明显升高(P<0.05),骨小梁分离度、模型结构指数均降低(P<0.05)。说明逆灸肾俞穴改善去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠股骨骨松质结构优于胃俞组。3.肾俞组与胃俞组均能降低去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠钙磷流失,提高血清雌激素水平,且肾俞组效果优于胃俞组。(1)全自动生化仪结果:与空白组比较,假手术组尿Ca/Cr、尿P/Cr无统计学差异(P>0.05),说明大鼠手术创伤3个月后,创伤因素不会对大鼠的骨质代谢产生影响;与空白组、假手术组比较,模型组尿Ca/Cr、尿P/Cr升高(P<0.05),结合实验一与实验二,说明大鼠去卵巢后,会导致骨代谢异常,骨吸收相对亢进,引发骨质疏松症;与模型组比较,胃俞组与肾俞组尿Ca/Cr、尿P/Cr降低(P<0.05),结合实验一与实验二,说明逆灸胃俞与肾俞二穴能够降低去卵巢诱导的骨质疏松模型大鼠的骨吸收亢进;与胃俞组比较,肾俞组尿Ca/Cr、尿P/Cr降低(P<0.05),说明在逆灸降低去卵巢诱导的骨质疏松症模型大鼠骨吸收亢进上,肾俞穴优于胃俞穴。(2)酶联免疫吸附剂测定结果:与空白组比较、假手术组血清雌二醇水平无明显差异(P>0.05),说明手术创伤并不会影响大鼠雌二醇水平出现明显变化;与空白组、假手术组比较,模型组大鼠血清雌二醇水平明显下降(P<0.05),说明去卵巢后,由于失去卵巢的分泌,大鼠体内雌激素水平骤减;与模型组比较,胃俞组与肾俞组血清雌二醇水平升高(P<0.05),说明逆灸胃俞穴与肾俞穴能提高大鼠血清雌二醇水平;与胃俞组比较,肾俞组血清雌二醇水平升高(P<0.05),说明逆灸提高大鼠血清雌二醇水平,肾俞穴优于胃俞穴。结论逆灸胃俞穴与肾俞穴都能提高大鼠雌激素水平,降低骨质流失,提升骨密度,且肾俞穴优于胃俞穴。但在保护骨微结构完整性上,肾俞穴有显著改善作用,而胃俞改善作用较弱。故肾俞穴是逆灸背俞穴防治OP的关键穴位,临床与科研上应着重选择肾俞穴作为逆灸穴位。