黄参多糖的提取、分离纯化、单糖组成、硫酸化修饰和降血糖作用研究

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黄参(Sphallerocarpus gracilis, SG)是一种多年生纯天然草本植物,有很高的营养和药用价值,是一种纯天然绿色保健食品。本文以山丹黄参为原料,研究了黄参多糖的提取工艺、分离纯化、单糖组成及其降血糖作用。用常规热水提取法、超声波辅助提取法和超声波联合酶法三种方法提取黄参多糖,通过单因素实验和响应面优化得到了三种提取工艺的最佳条件;以黄参多糖的得率为评价指标,比较三种提取方法得出超声波联合酶法是黄参多糖的最佳提取方法。提取工艺条件为:木瓜蛋白酶浓度0.4%,纤维素酶浓度2%,酶解时间25min,酶解温度61℃,pH值等于5.8,料液比1:40(g/mL),超声波功率为152.5W(61%),黄参多糖得率为19.01%。黄参多糖(S. gracilis polysaccharide,SGPHWE)经酶法+sevage联用法脱蛋白、透析、DEAE-celloluse52柱层得到高纯度的黄参多糖,总糖含量为93.27%。GC-MS法分析结果表明:黄参多糖由Rha、Ara、Man、Glu和Gal五种单糖组成,摩尔比为:4.12︰8.99︰5.45︰65.94︰15.5。GPC法测得黄参多糖的分子量Mw=7.413×105,Mn=2.104×105g/mol。通过考察黄参多糖对DPPH自由基、 OH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力和还原力,结果表明,SGP具有良好的抗氧化活性。以黄参多糖为原料,用CSA/Py法合成黄参多糖硫酸酯(SSGP),以黄参多糖硫酸酯中的硫含量(S%)为指标,建立了黄参多糖硫酸酯的制备工艺条件为:酯化试剂比例(氯磺酸︰吡啶)1︰1.3,反应时间3.4h,反应温度65℃,黄参多糖硫酸酯中硫含量可达到12.08±0.32%(n=5),取代度为0.99±0.02。用红外光谱、GC-MS等手段对SSGP的结构进行了表征,并对其抗氧化活性做了评价,结果表明,硫酸化后,SSGP的分子量减小,单糖种类没有发生变化,硫酸化黄参多糖比硫酸化以前抗氧化能力有了明显提高。用四氧嘧啶(ALX,alloxan)诱导建立大鼠的糖尿病模型,以不同剂量黄参多糖(SGP)灌胃糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠,实验期满后发现SGP可显著降低四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的血糖水平,降低糖尿病大鼠胰高血糖素含量和血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDT-C),提高糖尿病大鼠血清胰岛素水平和高密度脂蛋白(HDT-C)水平;能在一定程度上修复四氧嘧啶对糖尿病大鼠肝脏和肾脏的损伤,显著降低糖尿病大鼠血清中的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、胆红素(TBIL)、肌酐(BUN)和尿素氮(Scr)含量;能提高机体抗氧化功能,提高糖尿病大鼠血清、肝脏和肾脏SOD和CAT活性,降低MDA含量,清除体内的自由基,减小自由基对机体和胰岛细胞的损伤作用,促进胰岛素分泌,降低血清葡萄糖水平。本研究应用超声波联合酶法首次从黄参中提取黄参多糖,优化了黄参多糖的提取工艺,测定了黄参多糖的分子量、单糖组成和体外抗氧化活性;以黄参多糖为原料合成黄参多糖硫酸酯,研究了黄参多糖硫酸酯的制备工艺条件,分析测定黄参多糖硫酸酯的分子量和单糖组成和体外抗氧化活性;用四氧嘧啶诱导大鼠建立糖尿病大鼠模型后用不同剂量的黄参多糖灌胃大鼠,结果证明黄参多糖是一种天然植物高分子降糖产品,无毒副作用,可进一步开发成一种新型降糖药物。
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