IL-17在泡球蚴感染大鼠肝移植免疫中的表达及意义

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目的:(1)建立稳定的泡球蚴感染大鼠肝移植(ROLT)模型,观察肝移植术后实验组(E.M~+-ROLT)与对照组(E.M~--ROLT)的生存时间,检测肝功能,病理分析移植肝排斥情况,探讨泡球蚴感染免疫与肝移植免疫的关系。(2)检测受体血清IL-17细胞因子表达,肝移植物中IL-17蛋白及IL-17mRNA的表达情况,初步探明Th17型细胞因子(IL-17)在泡球蚴感染大鼠肝移植模型中的表达及其意义。方法:(1)以Lewis(LEW)大鼠为供体,Brown Norway(BN)大鼠为受体,采用二袖套法建立大鼠肝移植(ROLT)模型。实验组(E.M~+-ROLT)肝移植受体BN大鼠皮下接种泡球蚴,对照组(E.M~--ROLT)BN大鼠未皮下接种泡球蚴。观察肝移植术后两组受体的生存时间,(2)术后第7天随机处死14只受体大鼠,下腔静脉取静脉血5mL,取两份肝脏组织,分别液氮冷冻保存和中型福尔马林固定。(3)分别检测两组受体鼠的肝功(ALT、AST和T-BIL),肝组织病理,分析排斥情况。ELISA检测血清IL-17、IL-23、TGF-β表达,免疫组化检测肝IL-17表达,real-time RT-qPCR检测肝IL-17mRNA表达,分析两组Th17型细胞因子(IL-17)的表达。结果:(1)泡球蚴皮下感染成功率为85.0%(34/40只)。(2)肝移植术后实验组(E.M~+-ROLT)组和对照组(E.M~--ROLT)的生存时间分别为24天和11.5天。(3)两组ALT表达都升高,但二者差异无统计学意义(P>0.05),两组均出现AST和T-BIL升高,对照组(E.M~--ROLT)高于实验组(E.M~+-ROLT),两组差异有统计学意义(均P<0.05)。(4)对照组(E.M~--ROLT)在第7天出现强烈排斥,而实验组(E.M~+-ROLT)则排斥不是很明显,两组Banff97RAI评分差异有统计学意义(P<0.05),评分分别为7.67±1.03和5.50±1.28。(5)在肝移植术后第7天,IL-17在实验组(E.M~+-ROLT)和对照组(E.M~--ROLT)两组的表达用不同检测:1)免疫组化评分为:2.33±1.37和5.00±2.10,差异有统计学意义,P<0.05。2)ELISA检测为:(16.52±6.41)pg/mL和(28.07±8.43)pg/mL,差异有统计学意义,P<0.05。3)real-time RT-PCR检测,IL-17/β-actin相对表达量为:0.65±0.27和0.99±0.41,P<0.05,差异有统计学意义。(6)血清表达IL-23水平为实验组(E.M~+-ROLT):(422.48±54.47)pg/mL,明显低于对照组(E.M~--ROLT):(685.18±31.42)pg/mL,P<0.05,差异有统计学意义。(7)血清表达TGF-β水平为实验组(E.M~+-ROLT):(8.42±2.04)ng/mL,明显低于对照组(E.M~--ROLT):(7.67±1.44)ng/mL,但二者差异没有统计学意义,P>0.05。结论:(1)成功建立了BN大鼠继发性泡球蚴皮下感染模型,为后续实验研究奠定了基础。(2)成功建立了泡球蚴感染大鼠肝移植模型,为研究寄生虫免疫与肝移植免疫间的相关性奠定了基础。(3)泡球蚴感染免疫能延长移植肝的生存时间。(4)血清中及移植肝中低表达的IL-17能抑制泡球蚴感染大鼠移植肝急性排斥,延长移植肝的生存。
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