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背景非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是代谢综合征在肝脏的表现,其患病率不断上升,是目前最常见的慢性肝病。近年来,随着肠肝轴理论的提出,以肠道菌群为靶点研究NAFLD的发病机制逐渐成为研究热点。肠道菌群的改变可以引起肝脏炎症及脂肪积累,进而导致NAFLD。复方丹参滴丸主要由丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹酚酸、皂苷等组成。研究表明,丹参可以减轻肝脂肪变性和纤维化,丹参酚冰片酯可以通过调节肠道菌群减轻高脂饮食小鼠的肥胖、肝脂肪变性及低度全身炎症。但是复方丹参滴丸改善非酒精性脂肪肝病的具体机制仍未阐明。我们推测复方丹参滴丸可能是通过调节肠道菌群来改善非酒精性脂肪性肝病。目的观察复方丹参滴丸对高脂饮食小鼠非酒精性脂肪性肝病及肠道菌群的影响,并初步探究复方丹参滴丸、NAFLD、肠道菌群三者之间的关系。方法1.32只KKAy雄性小鼠予高脂饮食4周建立NAFLD小鼠模型,随机分为模型(Model)组、低剂量复方丹参滴丸(LCDDP)组、中剂量复方丹参滴丸(MCDDP)组、高剂量复方丹参滴丸(HCDDP)组。同时,8只C57BL/6级雄性小鼠作为对照(Con)组予普通饲料喂养。LCDDP、MCDDP、HCDDP组分别给予 13.5mg/kg/d、27mg/kg/d、40.5mg/kg/d 复方丹参滴丸灌胃,Model 组及Con组给予等量的蒸馏水灌胃。各剂量复方丹参滴丸干预12周后,测定各组小鼠血脂水平及肝组织炎症指标水平,采用苏木精-伊红染色(HE)、油红O染色以及Masson染色切片、透射电镜观察各组小鼠肝组织病变程度,同时采用qRT-PCR和Western blot观察各组小鼠肝脏Toll样受体4(TLR4)信号通路因子mRNA及蛋白水平的表达。2.运用16SrRNA测序技术来研究复方丹参滴丸对NAFLD小鼠肠道菌群结构的影响。3.运用GC-MS方法对各组小鼠粪便短链脂肪酸(SCFAs)的含量进行测定。4.采用ELISA试剂盒测定各组小鼠血清LPS(内毒素)含量,运用HE染色观察各组小鼠回肠粘膜组织病理变化,以及透射电镜观察各组小鼠回肠粘膜的紧密连接结构的变化。结果1.动物实验表明,与模型组相比,各剂量复方丹参滴丸组NAFLD小鼠血清TCHO(总胆固醇)水平均显著降低(P<0.01),HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)水平降低(P<0.05);并且MCDDP组和HCDDP组肝组织肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的水平降低(P<0.05),肝组织油红O及HE切片染色、Masson染色结果显示,复方丹参滴丸可显著改善NAFLD小鼠肝细胞脂质沉积及纤维化。MCDDP组和HCDDP组中NAFLD小鼠肝脏Toll样受体4(TLR4)信号通路中TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白水平的表达降低(P<0.05)。2.16srRNA显示:①复方丹参滴丸干预后,增加了 NAFLD小鼠与Con组小鼠肠道菌群的相似性,改善了 NAFLD小鼠肠道菌群紊乱。②与Model组相比,MCDDP组降低了 NAFLD小鼠肠道菌群中的厚壁菌门/拟杆菌门(Firmicues to Bacteroidetes,F/B)的比值(P<0.05),并且MCDDP组产丁酸盐细菌毛螺菌科(norank-f-Lachnospiraceae)的丰度显著增加。3.与Model组相比,Con组小鼠肠道内乙酸(Ace)含量降低(P<0.05),戊酸(Val)及己酸(Hex)含量均升高(P<0.05),总短链脂肪酸(SCFA)含量减低(P<0.05);LCDDP组小鼠肠道内乙酸(Ace)含量降低(P<0.05),己酸(Hex)和异己酸(Isohex)含量增高(P<0.05),总短链脂肪酸(SCFAs)含量降低(P<0.05);MCDDP组丁酸(But)含量增高(P<0.05);MCDDP组和HCDDP组中己酸(Hex)和异己酸(Isohex)含量增高(P<0.05)。各剂量复方丹参滴丸组与Con组相比短链脂肪酸无差异。4.与Model组相比,MCDDP组NAFLD小鼠血清内毒素的含量降低(P<0.05),回肠组织HE切片染色结果显示,复方丹参滴丸可抑制肠上皮细胞坏死脱落,透射电镜显示,复方丹参滴丸可以提高NAFLD小鼠肠上皮细胞紧密连接完整性。结论复方丹参滴丸可以改善非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏脂质沉积以及炎症反应,其机制可能是通过调节NAFLD小鼠肠道菌群结构,促进丁酸等SCFAs的增加,降低LPS水平,促进肠粘膜机械屏障的恢复,并抑制肝脏TLR4信号通路的表达。