IL-22对大鼠小体积移植肝保护作用的研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:linxunchang
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【目的】建立大鼠全肝移植模型、50%减体积肝移植模型和30%小体积肝移植模型,探究IL-22在不同体积肝移植模型中的表达;建立30%小体积肝移植模型,探究IL-22对小体积移植肝的保护作用。【方法】第一部分,选择雄性SD大鼠,建立大鼠全肝移植模型(n=30),50%减体积肝移植模型(n=30)和30%小体积肝移植模型(n=30),记录术中供、受体手术时间,冷缺血时间、无肝期及下腔静脉阻断时间,观察大鼠7天内生存情况。第二部分,建立全肝移植模型全肝移植组(n=48),50%肝移植模型50%肝移植组(n=48)和30%肝移植模型30%肝移植组(n=48),每组分别在术后6小时、1天、3天和7天处死6只大鼠,检测血清ALT、AST水平,计算肝脏再生率,对肝脏组织进行HE染色及免疫组化PCNA染色,使用RT-PCR检测IL-22mRNA;使用Western blot法检测IL-22与STAT3。第三部分,建立大鼠30%小体积肝移植模型,随机分为实验组(n=56),术中注射大鼠重组IL-22;对照组(n=56),术中注射生理盐水。术中记录供、受体手术时间,冷缺血时间,无肝期和下腔静脉阻断时间,在术后6小时,1天,3天和7天四个时间点,每组处死5只大鼠,检测血清ALT、AST,计算肝脏再生率,对肝组织进行HE染色及免疫组化PCNA染色,两组随机选取8只术后大鼠用于生存率比较,观察周期为7天。【结果】第一部分:三组术中记录的各项指标未见统计学差异,全肝移植组、50%肝移植组和30%肝移植组7天生存率分别为93.3%(14/15),86.7%(13/15)和46.7%(7/15)。第二部分:在术后6小时、1天两个时间点30%肝移植组血清ALT、AST水平显著高于50%肝移植组(P<0.05);HE染色提示30%肝移植组肝脏组织结构损伤大于另外两组;肝再生率分析显示30%肝移植组在各个时间点均低于50%肝移植组(P<0.01);50%肝移植组PCNA阳性细胞率提示术后1天肝细胞再生迅速,而30%肝移植组术后3天开始升高;在50%肝移植组IL-22 mRNA在术后1天大量增加,高于另外两组(P<0.01),在30%肝移植组,术后第3天IL-22 mRNA表达继续增多,并且高于另外两组(P<0.01),术后第7天仍保持较高水平且高于另外两组(P<0.01)。Western blot检测显示,50%肝移植组的IL-22在术后6小时、1天时表达逐渐增高,30%肝移植组术后1天开始增高,至术后7天,仍有较高的表达;STAT3在术后7天内的表达与对照组相比较基本无变化;p-STAT3在50%肝移植组术后6小时开始有较高表达,在30%肝移植组,术后6小时可见表达,随后表达增多,在术后第7天,仍可见较高程度的表达。第三部分:术中记录相关信息未见统计学差异;术后1天实验组血清ALT、AST水平低于对照组(P<0.05);HE染色提示实验组在术后1天肝脏组织结构开始恢复;实验组的肝脏再生率均高于对照组;PCNA提示,实验组肝细胞再生较早,术后1天阳性细胞率显著高于对照组(P<0.05)。实验组大鼠7天生存率为62.5%(5/8),对照组大鼠7天生存率为37.5%(3/8)。【结论】1、大鼠肝移植以及部分肝移植模型是一个难度较高的模型,通过熟练显微手术操作,注重手术细节,可以获得较理想的手术成功率与生存率,本研究中,各组之间术中供体手术时间、移植肝冷缺血时间、受体无肝期、受体肝下下腔静脉阻断时间以及受体手术时间无统计学差异,模型趋于稳定,可以用于进一步的研究。2、50%大鼠部分肝移植模型组IL-22的表达要早于30%肝移植组;同时肝细胞的损伤程度与肝细胞再生的变化趋势与IL-22表达具有一定的相关性,并且IL-22表达与p-STAT3的表达也有一定的相关性,因此推测,IL-22可能通过STAT3通路,起到改善肝脏功能、促进肝脏再生的肝脏保护作用。3、术中给予小体积肝移植大鼠重组IL-22,可以在移植术后早期促进移植肝脏的功能恢复,同时促进小体积移植肝脏再生,因此推测通过注射大鼠重组IL-22,可以在移植术后早期促进肝脏功能恢复与肝脏再生,从而对大鼠小体积肝移植的肝脏起到保护作用。
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