猪附红细胞体（Mycoplasma suis）是能够引起猪贫血的一种病原体,在临床上可引起能明显威胁生命的溶血性贫血或轻度慢性贫血。猪附红细胞体病是一类全球性的疾病,对全世界的猪生产有着非常重要的经济影响,因此,必须建立有效的猪附红细胞体病的检测方法,通过检测猪血清中猪附红细胞体抗体的含量是判定猪附红细胞体感染的一种重要方法。本试验建立了基于猪附红细胞体水溶性膜蛋白的间接ELISA检测方法,并进行了初步应用。首先用Tritonx-114提取方法对膜蛋白进行了提取,将猪附红细胞体膜蛋白提取出来后。结合SDS-PAGE电泳方法对提取后的膜蛋白进行了简单的蛋白分析,以猪附红细胞体水溶性膜蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法并对其条件进行优化。根据间接ELISA检测方法的基本步骤,对抗原的包被浓度,包被条件,血清稀释度及反应时间,二抗稀释度及反应时间等条件进行优化,选取30份猪附红细胞体阴性样本进行间接ELISA检测,测定OD450nm值,确定该方法的阴阳性临界值,以弓形虫、猪大肠杆菌、猪肺炎支原体等病原体阳性血清为样本进行特异性试验。通过重复性试验评价所建立的间接ELISA检测方法的稳定性。结果显示:提取的猪附红细胞体水溶性膜蛋白的分子量主要集中在45-180Ku,猪附红细胞体脂溶性膜蛋白的分子量主要集中在25-35 Ku。ELISA结果表明,基于猪附红细胞体水溶性膜蛋白的间接ELISA检测方法最适试验条件为:膜蛋白最佳包被浓度为0.15μg/μL,4℃过夜为最佳包被条件,5%脱脂乳为最佳封闭液,封闭条件为37℃封闭2 h,用PBS将血清稀释320倍,37℃孵育1h,酶标二抗稀释2 000倍,37℃孵育1h,显色时间5 min,加入2M H2SO4终止反应,测定OD450nm值。该方法的阴阳临界值为0.376,所有包被抗原与猪大肠杆菌,弓形虫以及猪肺炎支原体等阳性血清无交叉反应,本试验所建立的间接ELISA方法的特异性较强。重复性试验结果表明变异系数均小于10%。临床样本检测显示,阳性检出率为47.5%。本试验建立了一种特异、敏感的猪附红细胞体的血清学检测方法,可适用于猪附红细胞体病的临床检测。