乌龙茶种质资源的RAPD分析与离体保存

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福建茶树种质资源十分丰富,本研究以福建的30份乌龙茶茶树品种(系)为研究对象,采用RAPD分子标记技术,分析品种间的遗传多样性与亲缘关系。同时,以离体保存的金凤凰为材料,研究了乌龙茶种质限制性离体保存方法。主要研究结果如下:1.茶树富含多酚、多糖等杂质,增加了提取高质量DNA的难度。本研究在前人研究基础上,摸索出一套操作简单、快速提取茶树DNA的改良CTAB法。结果表明,提取的茶树DNA在质量和数量上均可满足RAPD-PCR要求。2.从37条RAPD随机引物中筛选出11条多态性引物,对30份茶树品种(系)进行RAPD-PCR扩增,共扩增获得125条谱带,其中多态性条带为108条,多态性百分率为86.40%。应用NTsys 2.10e软件,进行遗传相似性系数计算,30份茶树品种之间的遗传相似系数在0.410.83之间。结果表明,乌龙茶茶树种质资源的遗传变异宽广,多态性高,遗传资源丰富。3.依据RAPD结果,对供试的茶树品种进行聚类分析,构建了聚类树状图,揭示了不同茶树品种之间的亲缘关系和遗传相似性。当以相似系数为0.40划分时,将30份茶树资源分为3个类群,其中筲绮品种单独为一类,大部分原产于安溪的茶树品种(系)聚为一大类。金观音的母本是铁观音,RAPD分析得到两者的Nei遗传相似系数分别是0.82,显示金观音与铁观音亲缘关系较近,验证了将RAPD技术作为品种亲缘关系鉴定的可靠性。RAPD分析结果,为以后育种工作奠定理论依据,提高育种效率。4.在乌龙茶茶树种质离体保存研究中,以金凤凰品种为材料,比较了不同浓度的甘露醇、蔗糖等渗透剂以及PP333和ABA两种生长抑制剂等因素对茶树试管苗的限制性离体保存的影响。结果表明,在1/2MS培养基中添加15 g/L甘露醇的处理,保存效果最好,最适培养基为1/2MS+15 g/L甘露醇,7个月后比较各处理存活率,此培养基上最高,为82.2%。适合金凤凰长期离体继代的基本培养基是1/2MS,最适的蔗糖、PP333和ABA的浓度分别是:30 g/L、20 mg/L和0.5 mg/L。
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