五龙鹅MHCⅠ基因克隆、组织表达及分子特性的研究

来源 :莱阳农学院 青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:icerjack
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主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)是由紧密连锁的高度多态的基因位点所组成的位于染色体上一个遗传区域,广泛存在于所有脊椎动物,具有高度的多态性和保守性。该基因区编码的蛋白通常称为MHC分子或MHC抗原,是移植排斥的主要决定簇。根据结构和功能可将MHC分为I、II、III三类。在结构上I类分子可分成肽结合区、Ig样区、跨膜区和胞浆区4个部位。国内外关于鹅免疫方面的研究较少,本试验以我国优良的地方品种——五龙鹅为试验对象,主要研究五龙鹅MHCclassⅠ基因分子特性,获得如下研究结果:1根据GenBank中鸡(XM424372),鼠(AY064389),斑马鱼(BC066745)等的MHCclassⅠ基因保守序列,使用Primer Premier5.0与Oligo6.0程序设计一对引物,利用反转录-聚合酶链式反应( RT-PCR)从有丝分裂原刀豆蛋白A (ConA)刺激18h活化的五龙鹅脾细胞中扩增出相应大小的基因,经酶切鉴定和PCR鉴定,将目的片段与pAT2载体连接,转化到DH5α感受态中,提取质粒,对序列进行测定,扩增出1062bp的基因,将测得的序列递交到GenBank中,获得登陆号为:AM114925。2根据测得的基因cDNA序列,重新设计引物,提取基因组DNA,利用LA-PCR方法从五龙鹅基因组DNA中克隆了MHC class I类分子的基因组序列并分析其基因组结构,经过酶切鉴定和PCR鉴定,获得五龙鹅的基因组MHC class I序列,共有2594bp个碱基,将测得的序列递交到GenBank中,获得登陆号为:AM114924。利用ContigExpress生物软件和VecScreen程序比较五龙鹅MHC class I的DNA序列和cDNA序列,发现鹅MHC class I含有8个外显子和7个内含子。3用T aqMan技术建立了一种实时Realtime-PCR的方法,用于检测鹅MHC class I
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